DAPI是一種常用的多色核熒光染料它的藍(lán)色熒光顏色光鮮顯著區(qū)別于其他結(jié)構(gòu)熒光探針?biāo)l(fā)出的綠、黃、紅等熒光。
產(chǎn)品說(shuō)明：
收到后儲(chǔ)藏：*室溫*避光
分子量• 350.3 （dihydrochloride） • 457.5 （dilactate）
吸收峰/散射峰是461nm/358nm。連接至DNA
DAPI是一種常用的多色核熒光染料它的藍(lán)色熒光顏色光鮮顯著區(qū)別于其他結(jié)構(gòu)熒光探針?biāo)l(fā)出的綠、黃、紅等熒光。
使用時(shí)應(yīng)遵照我們的備忘錄，DAPI染色劑于胞核染色，幾乎沒(méi)有細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記點(diǎn)。任意一形態(tài)的DAPI在這說(shuō)明內(nèi)介紹的都有很好的效果。DAPI, dilactate可能水溶性更好。復(fù)染技術(shù)說(shuō)明與寬范圍細(xì)胞學(xué)標(biāo)記技術(shù)相同———直接或間接抗體結(jié)合探測(cè)方法，mRNA原位雜交或用細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性熒光染料染色。DAPI還可用于在多色流式細(xì)胞試驗(yàn)中分析熒光標(biāo)記細(xì)胞。以下說(shuō)明可用于指導(dǎo)組織染色或非固定的細(xì)胞或組織染色。
緒論
藍(lán)色熒光的DAPI核酸染料優(yōu)先染雙鏈DNA，它與小溝槽內(nèi)的AT堿基對(duì)結(jié)合。1. DAPI連接到雙鏈DNA產(chǎn)生一個(gè)20折疊的熒光增強(qiáng)這是由于水分子在DAPI以及小溝槽的移位造成的。2.DAPI 也可以用于連接RNA，只是連接的方式不同———一種觀點(diǎn)是可能是AU堿基對(duì)選擇性嵌入。3. DAPI/RNA 復(fù)合體可以出現(xiàn)更長(zhǎng)波長(zhǎng)的zui大熒光激發(fā)比DAPI/dsDNA復(fù)合體并且量子產(chǎn)率僅為它的20﹪。
材料
儲(chǔ)存與操作
DAPI dihydrochloride （MW = 350.3） 與DAPI dilactate（MW = 457.5）均為10mg包裝的。FluoroPure™（熒光純）級(jí)別的DAPI dihydrochloride 純度 ≥98%也為10mg包裝的。收到后將管形瓶存放于室溫并避光保存。固體至少可穩(wěn)定保存一年。
將5 mg/mL DAPI（14.3 mM 的dihydrochloride 或10.9 mM 的 dilactate）溶解到一個(gè)管形瓶（10 mg）有2 mL 的去離子水 （dH2O） 或是二甲基酰胺 （DMF）。水溶性差的DAPI dihydrochloride溶到水中可能需要更長(zhǎng)的時(shí)間，聲裂法有時(shí)是必要的。
要點(diǎn)
沒(méi)有一種DAPI衍生物是極易溶于磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）的。需長(zhǎng)期保存時(shí)原液可分裝并保存在≤–20°C。短期保存時(shí)可以在2–6°C避光保存。操作適當(dāng)DAPI溶液至少可穩(wěn)定保存六個(gè)月。
注意
DAPI是已知的一種誘變劑，操作要小心。顏料必須安全可控的處理。DAPI可在水溶液中被活性炭濾過(guò)。吸附顏料的炭必須經(jīng)安全可行的方法處理。
熒光光譜性質(zhì)
DAPI 結(jié)合到 dsDNA上吸收峰是358 nm, 散射峰是 461 nm。DAPI能夠被氙或水銀燈或UV激光激發(fā)。利用UV激發(fā)源DAPI可被用于流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)。
熒光顯微術(shù)中復(fù)染法粘附細(xì)胞的說(shuō)明
樣品制備
用固定法處理你的標(biāo)本，DAPI染色通常在其他染色的zui后進(jìn)行。注意：標(biāo)本的固定和透化并非DAPI復(fù)染的必要步驟。
復(fù)染法說(shuō)明
1.1 將標(biāo)本簡(jiǎn)單的放入磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）中保持平衡。
1.2 在PBS中將DAPI原液稀釋到 300 nM，將大約300 μL 這種稀釋的 DAPI染液加到蓋玻片上制備，確保細(xì)胞被*覆蓋。
1.3 培養(yǎng)1–5 minutes.
1.4 將標(biāo)本在PBS液中沖洗幾次，濾干蓋玻片上過(guò)多的緩沖液。我們推薦使用固裝的含有抗退色試劑的介質(zhì)，如我們*提供的SlowFade ® Antifade Kit （S2828）, SlowFade Light Antifade Kit（S7461） or ProLong ® Antifade Kit （P7481）.
1.5 用熒光顯微鏡及合適的濾鏡觀察標(biāo)本
流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)中懸浮細(xì)胞復(fù)染的說(shuō)明
樣品制備
用固定法處理你的標(biāo)本或采取以下方法：
2.1 收集2 × 105 到 1 × 106 cells的細(xì)胞懸液一份。
2.2 通過(guò)離心及去除上懸浮物來(lái)獲得細(xì)胞團(tuán)塊。
2.3 將在殘留液的團(tuán)塊重新懸浮，并在室溫中加入1 mL 的 PBS。
2.4 將重新懸浮細(xì)胞整體轉(zhuǎn)移到4 mL –20°C的無(wú)水乙醇中。轉(zhuǎn)移時(shí)通過(guò)移液緩慢的將懸浮液在旋轉(zhuǎn)峰速時(shí)移入乙醇中。留細(xì)胞在–20°C的無(wú)水乙醇中放置 5–15 minutes。
2.5 通過(guò)離心及去除上懸浮物來(lái)獲得細(xì)胞團(tuán)塊
2.6輕彈試管使團(tuán)塊松動(dòng)在室溫下加入5 mL的PBS讓細(xì)胞再水合15 minutes
復(fù)染法說(shuō)明.
3.1 將DAPI原液稀釋到3 μM在染色緩沖液中（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet ® P-40）.每個(gè)細(xì)胞標(biāo)本需要1 mL
3.2 離心懸浮細(xì)胞（from step 2.6）棄上清，輕彈松動(dòng)團(tuán)塊并加1 mL DAPI在緩沖液中的稀釋液。
3.3 室溫下培養(yǎng)15 minutes。
3.4 在染料存在的情況下用流式細(xì)胞儀分析。如果細(xì)胞在熒光顯微鏡下可見(jiàn)，離心標(biāo)本棄上清并且在新鮮緩沖液中再懸浮。點(diǎn)一滴懸液在載玻片上，蓋蓋玻片觀察。
染色體熒光素原位雜交復(fù)染法的說(shuō)明
樣品準(zhǔn)備
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟5，6準(zhǔn)備標(biāo)本。
在復(fù)染之前用去離子水快速?zèng)_洗備好的樣本以去除殘留在玻片上的buffer鹽，這zui后的沖洗有助于減少玻片上的非特異背景染色。
將標(biāo)本在空氣中晾干。
復(fù)染說(shuō)明
4.1 用PBS將DAPI原液稀釋到30nM，將300μL這種染色液直接移取到標(biāo)本上，用一個(gè)塑料的蓋玻片使染液在玻片上分布均勻。
4.2 將標(biāo)本在暗房中室溫培養(yǎng)30分鐘。
4.3 小心的移去蓋玻片，用PBS 或dH2O快速?zèng)_洗標(biāo)本，以除去未結(jié)合的染液。
4.4 用吸水紙?jiān)诮M織周?chē)p輕印拭去玻片上多余的液體。
4.5 將一個(gè)玻璃蓋玻片蓋到載玻片上，用蠟或者指甲油封閉，也可以將標(biāo)本按照廠商的說(shuō)明用抗脫色試劑包埋。
4.6 用熒光顯微鏡在適當(dāng)?shù)臑V光器下觀察標(biāo)本。
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
| 貨號(hào) | 名稱(chēng) | 產(chǎn)地 | 規(guī)格 | *（元） |
| | DAPI | | 10mg | 460 |
| 46035ES10 | DAPI 溶液 | YEASEN | 10ml | 98 |
| 46035ES50 | DAPI 溶液 | YEASEN | 50ml | 335 |
初級(jí)會(huì)員·12年
