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供應(yīng)簡(jiǎn)介

Blasticidin S是一種來(lái)自Streptomyces griseochromogenes的核苷肽類抗生素，通過(guò)干擾核糖體中肽鍵的形成來(lái)特異性抑制原核和真核生物的蛋白質(zhì)合成。Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品信息（Invivogen原裝，現(xiàn)貨供應(yīng)）：

貨號(hào)	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報(bào)價(jià)	*（元）	庫(kù)存
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg	598	598	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*2	1050	1050	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*5	2310	2150	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*10	4200	3700	是

作用機(jī)理：

Blasticidin S是一種來(lái)自Streptomyces griseochromogenes的核苷肽類抗生素，通過(guò)干擾核糖體中肽鍵的形成來(lái)特異性抑制原核和真核生物的蛋白質(zhì)合成。Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

基本信息：

CAS：3513-03-9分子式: C₁₇H₂₆N₈O₅, 1 HCl 純度：>95%（HPLC）

分子量: 458.90 濃度：10 mg/ml in HEPES 緩沖液，pH 7.5

結(jié)構(gòu):

抗性基因：

目前經(jīng)克隆和測(cè)序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產(chǎn)生菌Streptoverticillum sp.的乙?；D(zhuǎn)移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括為從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。bsr和 BSD基因是zui主要的選擇性標(biāo)記基因，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，也可以用于E.Coli中。

應(yīng)用濃度：

1）Escherichia coli（推薦濃度：25-100 µg/ml）

E. coli對(duì)Blasticidin S的敏感性稍差，轉(zhuǎn)化子對(duì)Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基（pH 8）進(jìn)行篩選，添加100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。推薦使用InvivoGens Fast-Media®Blas以獲得結(jié)果。

2）哺乳動(dòng)物細(xì)胞（推薦濃度：1-50 µg/ml）

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)滅殺曲線來(lái)確定*使用濃度。

一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議工作濃度：

細(xì)胞	種屬	組織	培養(yǎng)基	Blasticidin S Concentration（μg/ml）
HeLa	Human	Uterus	DMEM	3-10
293	Human	Kidney	DMEM	3-10
B16	Mouse	Melanoma	RPMI	3-10
PC1.0	Hamster	Adenocarcinoma	RPMI	10-30

操作步驟（哺乳動(dòng)物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選）：

Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，在含有Blasticidin S的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

（1）轉(zhuǎn)染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代；（注：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。細(xì)胞分盤時(shí)覆蓋率不超過(guò)25%）

（2）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基；

（3）7天后檢測(cè)細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

（4）轉(zhuǎn)移5-10個(gè)耐受克隆到35mm細(xì)胞盤中。加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

Invivogen Blasticidin S的應(yīng)用和具體濃度：

物種	細(xì)胞系/株	載體/質(zhì)粒	Blasticidin S Concentration （μg/ml）
E. coli	MIC128	pHASH102	250
B.subtilis	RM125	pGETS109	500
P. falciparum	3D7/GC03 parasites	pLN-ACP-V5	2.5
Dictyosium discoideum	DAip1-null	pBsr2	10
Rat	NIH3T3	pcDNA6.2	5
Human	HeLa	pEF-BOS	2
Human	LLCMK2	SeVdp	5
Human	293	pOG44	15
Mouse	B16	pCMVβ	50
Mouse	B16	pBLAST	50

另Invivogen提供攜帶bsr基因的質(zhì)粒產(chǎn)品：

質(zhì)粒名稱	抗性基因	貨號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)地
pSELECT-blasti-mcs	bsr	psetb-mcs	20 μg	invivogen
pSELECT-blasti-LacZ	bsr	psetb-lacz	20μg	invivogen
pMONO-blasti-mcs	bsr	pmonob-mcs	20μg	invivogen
pMONO-blasti-gfp	bsr	pmonob-gfp	20μg	invivogen
pVITRO1-blasti-mcs	bsr	pvitro1-bmcs	20μg	invivogen
pVITRO1-blasti-GFP/LacZ	bsr	pvitro1-bgfplacz	20 μg	invivogen
pVITRO2-blasti-mcs	bsr	pvitro2-bmcs	20μg	invivogen
pVITRO2-blasti-GFP/LacZ	bsr	pvitro2-bgfplacz	20μg	invivogen
psiRNA-h7SKblasti G1 Kit	bsr	ksirna3-b21	1 Kit	invivogen
pCpGfree-vitroBmcs	bsr	pcpgvtb-mcsg2	20μg	invivogen
pCpGfree-vitroB	bsr	pcpgvtb-lz	20μg	invivogen

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