標(biāo)準(zhǔn)溶液是通過(guò)高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC）進(jìn)行準(zhǔn)確分析的關(guān)鍵所在。與稱重法測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，通過(guò)移液配置標(biāo)準(zhǔn)品更能節(jié)省成本和時(shí)間。準(zhǔn)確移液也可加快完成配制過(guò)程。
在本應(yīng)用說(shuō)明中，對(duì)比了使用賽多利斯Tacta® 移液器 和Optifit吸頭與稱重法配制GC 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的準(zhǔn)確性，證明了要準(zhǔn)確移取乙醇、甲醇、丙酮或其他揮發(fā)性液體，必須采用反向移液和充分預(yù)濕移液器吸頭的方法。
簡(jiǎn)介
GC通常用于對(duì)葡萄酒和啤酒等酒精飲料中乙醇含量進(jìn)行定量。使用GC進(jìn)行乙醇定量需要使用標(biāo)準(zhǔn)曲線，而標(biāo)準(zhǔn)曲線是基于乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液以及內(nèi)標(biāo)（ISTD）（如1- 丁醇）等生成的。乙醇和1-丁醇都是揮發(fā)性液體，其難以進(jìn)行準(zhǔn)確的移液。遵循良好的移液實(shí)踐，并充分考慮揮發(fā)性液體的具體特性，可以使用空氣置換移液器解決這個(gè)問(wèn)題。
揮發(fā)性液體會(huì)一直向環(huán)境中揮發(fā)，直到與環(huán)境達(dá)到平衡。因此，在配液前反復(fù)吸排液體，用液體預(yù)潤(rùn)洗移液器吸頭，從而平衡吸頭內(nèi)的環(huán)境，并提高移液精度。在處理?yè)]發(fā)性液體時(shí)，反向移液也具有一定的優(yōu)勢(shì)。
材料和方法
移液器和移液器吸頭
使用賽多利斯Tacta® 移液器和賽多利斯Optifit 移液器吸頭配制標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液、ISTD 和樣品。
水
使用的二級(jí)水由配備袋式水箱系統(tǒng)的賽多利斯Arium® Advance 純水系統(tǒng)所制備。
標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液的配制
使用無(wú)水乙醇配制標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為：0.53%、0.95%、2.00%、5.03% 以及7.17%。
根據(jù)參考方法（表1）配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，使用Tacta® 移液器將不同體積的樣品移取到容量瓶中，同時(shí)使用賽多利斯Cubis® 天平稱取定量的乙醇。
表1. 乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法
飲料樣品的配制
通過(guò)使用Tacta® 移液器移液來(lái)稀釋酒精飲料，如表2所述。
表2. 分析飲料
內(nèi)標(biāo)的配制
使用1-丁醇作為ISTD，配制方式有以下兩種：
根據(jù)參考方法（表3，方法2）使用Tacta® 移液器將1-丁醇直接移取到GC小瓶中
用移液器移取10 mL溫度為20±0.1°C 的1-丁醇至2L的容量瓶中，然后使用溫度為20±0.1°C的水稀釋至標(biāo)定刻度，塞緊塞子并充分搖晃。
表3. 最終GC樣品的制備
GC 儀器及方法
按照表3所述配制最終樣品。樣品中的ISTD 最終濃度為0.45%（V/V）。將樣品（1 μL）進(jìn)樣至GC 系統(tǒng)中。配制兩份等量樣品，并對(duì)每份樣品進(jìn)行兩次分析。
結(jié)果與討論
乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。按照方法B所配制所標(biāo)準(zhǔn)溶液生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線（遵循良好移液實(shí)踐，包括預(yù)潤(rùn)洗及使用反向移液技術(shù)）與按照參考方法配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液所生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線大致類似。根據(jù)方法A所配制標(biāo)準(zhǔn)溶液所生成的曲線（未預(yù)潤(rùn)洗移液器吸頭，并使用正向移液法）與參考方法所得曲線的相似性較低。
方法C與方法B一樣，只是使用方法C 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)僅使用一支Tacta® 移液器來(lái)移取乙醇。該方法所得標(biāo)準(zhǔn)曲線與參考方法所得曲線的相似性也很低。我們建議使用標(biāo)稱體積盡可能接近目標(biāo)移液體積的移液器。此外，移液器的體積范圍應(yīng)涵蓋移取的目標(biāo)體積。
圖1. 使用參考方法和方法A-C所配制標(biāo)準(zhǔn)溶液生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用移液器直接將ISTD（1-丁醇）移至GC小瓶（表3，方法2）可得出與參考方法（圖2）相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。10 個(gè)色譜峰共洗脫后顯示出相似的曲線下面積。其中五份樣品根據(jù)參考方法配制（表3），而另外五份樣品根據(jù)方法2配制（表3）。兩組樣品的平均峰面積僅相差2.45%。這表明，您可以省略ISTD 稀釋液的單獨(dú)配制，而直接用移液器將1-丁醇移取到小瓶中。
圖2. 參考方法和方法2的GC重復(fù)性
總之，采用方法B配制標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液以及方法2配制最終GC樣品，可將樣品配制時(shí)間從大約35分鐘縮短到18分鐘（圖3）。
圖3. 樣品配置時(shí)間的比較
使用GC分析飲料樣品，并測(cè)定其乙醇含量（表4）。實(shí)驗(yàn)測(cè)定的乙醇含量與瓶上標(biāo)注的乙醇含量接近。標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液中最低乙醇濃度為0.53%（V/V），高于非酒精飲料（樣品1和5）標(biāo)注的乙醇濃度。因此，這些樣品的測(cè)定結(jié)果可能不太準(zhǔn)確，因?yàn)槠涑隽诵?zhǔn)范圍。
我們建議配制覆蓋整個(gè)濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)溶液；包括低于最低預(yù)期乙醇濃度樣品和高于最高預(yù)期乙醇濃度樣品的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在此次實(shí)驗(yàn)中，我們配制了五種標(biāo)準(zhǔn)溶液。為了提高準(zhǔn)確度，您還可以增加標(biāo)準(zhǔn)溶液的數(shù)量。
表4. 飲料中乙醇含量的標(biāo)定值和測(cè)定值
結(jié)論
在此次實(shí)驗(yàn)中，我們使用了移液良好實(shí)踐，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液及內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的配制，并采用GC對(duì)飲料中的乙醇進(jìn)行了半定量測(cè)定。建議使用反向移液技術(shù)移取揮發(fā)性液體。
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