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          德國賽多利斯集團(tuán)

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          上新品|Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡快速標(biāo)記試劑盒

          閱讀:288      發(fā)布時間:2024-5-16
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          細(xì)胞外囊泡(EV, Extracelluar Vesicle)是當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)和新診療療法的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。EV根據(jù)直徑大小和生物生成過程分為多種類型,其中大多數(shù)尺寸較小的EV被稱為外泌體(Exosome)。國家發(fā)改委于2022年印發(fā)的《“十四五”生物經(jīng)濟(jì)發(fā)展規(guī)劃》將“外泌體治療產(chǎn)品”首次納入國家經(jīng)濟(jì)發(fā)展規(guī)劃,2023年在“囊泡”和“外泌體”方向的國自然金額累計近1.5億元,立項(xiàng)近390項(xiàng),超過前兩年立項(xiàng)數(shù)[1]。

          截止至目前,EV和外泌體在國內(nèi)外的研究熱潮不減[2],在產(chǎn)業(yè)端也受到醫(yī)藥、生物技術(shù)、體外診斷產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)的爭相投資。

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          圖1. PubMed檢索外泌體相關(guān)研究論文發(fā)表數(shù)量

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          圖2. PubMed檢索Extracelluar Vesicle相關(guān)研究論文發(fā)表數(shù)量

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          活細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)EV樣本制備的挑戰(zhàn)

          在EV研究的初步階段,往往需要從干細(xì)胞等活細(xì)胞培養(yǎng)基,或血液、尿液和唾液等體液中分離出足夠量和高純度的EV。傳統(tǒng)的分離技術(shù)有沉淀法(P)、超速離心(UF)、體積排阻色譜法(SEC)、免疫親和捕獲(IAC)。這些方法往往耗時耗力,有時因?qū)嶒?yàn)者操作原因?qū)е翬V得率和純度都不甚理想。

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          賽多利斯EV分離純化標(biāo)記新方案

           

           

          為應(yīng)對EV分離和純化的挑戰(zhàn),賽多利斯推出了一種創(chuàng)新的Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡(綠色)標(biāo)記試劑盒。這款試劑盒結(jié)合了超濾法和膜過濾技術(shù),能夠均一化EV尺寸并適應(yīng)未來的規(guī)?;a(chǎn)。它提供了一個簡化且快速的操作流程,特別優(yōu)化了針對外泌體囊泡顆粒的分離。接下來讓我們一起來詳細(xì)了解一下吧。

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          Incucyte® Exofluor

          細(xì)胞外囊泡(綠色)

          快速標(biāo)記試劑盒

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          輕松3步的活細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)EV樣品快速制備

           

          Step 1

          EV熒光標(biāo)記30分鐘
          將EV熒光染料與各種來源EV和外泌體的懸液混合孵育

          Step 2

          超濾去除游離熒光染料5分鐘

          在賽多利斯Vivaspin® 2 超濾柱中去除游離的EV染料

          Step 3

          過濾去除非EV雜質(zhì)

          已去除游離的EV染料的EV懸液裝入注射器,通過賽多利斯Minisart® (0.22 μm) 過濾器同時完成滅菌并去除殘留的EV聚集體

           

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          圖3. Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡(綠色)標(biāo)記試劑盒簡便的操作流程

          通過將從以上3步法簡便快速獲得的熒光標(biāo)記EV和外泌體, Incucyte® 實(shí)時活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)與Cell-by-Cell Analysis 和Basic Analyzer軟件模塊配合使用,為您的EV和外泌體活細(xì)胞攝入量化成像研究賦能諸多實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性提升和新發(fā)現(xiàn)的洞察便利:

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          可攝入細(xì)胞類型廣泛:標(biāo)記純化的EV和外泌體適用于常用攝取實(shí)驗(yàn)細(xì)胞類型

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          圖4. 賽多利斯EV標(biāo)記試劑盒標(biāo)記的EV和外泌體可以在多種常用攝取細(xì)胞類型和培養(yǎng)基條件下被細(xì)胞正常攝取。用EV標(biāo)記的A549細(xì)胞來源外泌體處理后24小時拍攝圖像顯示,與對照組相比細(xì)胞形態(tài)沒有變化。僅染料處理組提示游離染料不會觸發(fā)細(xì)胞攝取。賽多利斯Exofluor細(xì)胞外囊泡快速標(biāo)記試劑盒染料通過與EV和外泌體牢固結(jié)合,均勻地標(biāo)記小型 EV(如外泌體)的質(zhì)膜。與 EV 不可逆結(jié)合并且可去除游離染料,雙管齊下地降低了攝取前或攝取期間染料非特異地附著到其他質(zhì)膜上的風(fēng)險。

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          兼容不同EV上游處理方法:不同細(xì)胞來源和純化方法(UF, SEC, TFF/IEX色譜法)獲得的EV和外泌體經(jīng)本試劑盒處理后都可被正常攝入細(xì)胞

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          圖5. Incucyte® 成像結(jié)果顯示A549人肺腺癌細(xì)胞系受體細(xì)胞攝取了采用Incucyte® Exofor-Green 標(biāo)記的各種EV(處理后24 小時)。使用超濾和SEC 方法 (HansaBioMed) 提取A549 來源外泌體,并以2 μg/ 孔用量加入到不同細(xì)胞系培養(yǎng)孔中進(jìn)行處理。使用人血漿來源的外泌體(Abcam,超濾提取法),濃度為 4 μg/ 孔。使用 TFF/IEX 色譜法提取間充質(zhì)干細(xì)胞和 HEK293T 來源的 EV (賽多利斯),并分別以 1.5 × 10?和 8.3 × 10?顆粒 / 孔用量加入到不同細(xì)胞系培養(yǎng)孔中進(jìn)行處理。

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          不干擾細(xì)胞的“真正”攝入:標(biāo)記后的EV細(xì)胞攝入呈濃度依賴性,不干擾細(xì)胞生長,并可證明是通過細(xì)胞攝取內(nèi)吞途徑而非非特異性細(xì)胞滲入

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          圖6. 使用TFF/IEX 色譜法純化來自HEK293T 細(xì)胞的EV,并使用Incucyte® Exofluor Green EV 標(biāo)記試劑盒進(jìn)行標(biāo)記,然后添加到A549 受體細(xì)胞中。在2天內(nèi)每2 小時采集一次相差和綠色熒光圖像,并使用Incucyte® Cell-by-Cell 軟件分析模塊進(jìn)行分析。

          1. 將標(biāo)記的EV 滴定約40 倍(42×10?和1×10? 顆粒/ 孔),并使用平均綠色熒光均值強(qiáng)度來評估EV 攝取情況??梢院芎糜^察到熒光強(qiáng)度顯示出的濃度依賴性變化

          2. 明場細(xì)胞計數(shù)分析表明(Phase Object Count, 標(biāo)準(zhǔn)化為t=0),在所有測試的不同濃度的標(biāo)記EV 下,細(xì)胞增殖沒有發(fā)生變化

          3. 將A549 細(xì)胞接種后培養(yǎng)過夜,然后在無外泌體的培養(yǎng)基中用細(xì)胞內(nèi)吞抑制試劑Dynasore(0.01 至100 μM)處理。使用Dynasore 處理后,立即加入用Incucyte® Exofor Green 標(biāo)記的Hansa A549 來源外泌體(2 μg/ 孔)。細(xì)胞攝取外泌體受到抑制的抑制劑濃度梯度依賴性作用(IC50=2.72 μM)反映在綠色熒光的強(qiáng)度中(圖中展示了24 小時監(jiān)測數(shù)據(jù))

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          如果您正在從事EV和外泌體在腫瘤學(xué)、干細(xì)胞發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞代謝、精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)等基礎(chǔ)研究,或者正在開展前沿小分子藥物、抗體和基因細(xì)胞治療等生物藥新療法的研發(fā),需要表征細(xì)胞內(nèi)EV攝取行為的同時評估宿主細(xì)胞數(shù)量形態(tài)的變化,或更好地了解EV攝入和有效載荷對生物功能的影響,那么賽多利斯EV標(biāo)記試劑盒將是您理想的選擇!

           

           

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          《Incucyte® 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)

          細(xì)胞外囊泡分析方案》

          下載文檔

          -參考文獻(xiàn)-

          [1] 1.55億!2023年外泌體相關(guān)國家自然科學(xué)基金盤點(diǎn)(blog.sciencenet.cn)

          [2] PubMed (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/)

           

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