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賽多利斯Octet® 非標(biāo)記分子互作分析系統(tǒng)和Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)相關(guān)文獻(xiàn)均超過了15,000篇，得到了市場和用戶的廣泛認(rèn)可。Octet® 是揭示分子機(jī)制和藥物表征的基本手段，而Incucyte® 可以大大增加體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的便捷性和準(zhǔn)確性。

那么，當(dāng)這兩種技術(shù)結(jié)合使用時(shí)，會(huì)擦出什么樣的火花呢？今天，陳老師將解析最近一個(gè)月內(nèi)關(guān)于這兩種技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用的優(yōu)秀文章，這些研究涵蓋了小分子研究、抗體藥物發(fā)現(xiàn)、再生醫(yī)學(xué)、蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)等多個(gè)領(lǐng)域。

分子膠是一類小分子化合物，它們能夠同時(shí)結(jié)合目標(biāo)蛋白和降解機(jī)制涉及的酶，形成三元復(fù)合物。P53是一個(gè)關(guān)鍵的腫瘤抑制蛋白，它通過特定的E3連接酶泛素化而降解。與P53和DUBs（去泛素化酶）結(jié)合的分子膠可能通過去泛素化來穩(wěn)定P53。復(fù)旦大學(xué)魯伯塤組研究人員篩選出了幾種可能與P53和DUBs（特別是USP7）結(jié)合的潛在分子膠。其中包括溴隱亭（BC，4L10），是一種FDA批準(zhǔn)的藥物。進(jìn)一步的研究驗(yàn)證了BC與USP7結(jié)合從而增加P53的穩(wěn)定性的機(jī)制。BC通過降低P53的降解，在體外抑制癌細(xì)胞的增殖，并在異種移植模型中抑制腫瘤生長。Octet® 和Incucyte® 是本篇文章用于藥物表征的重要手段。

圖1. Octet® 顯示幾種分子膠與P53和USP7的平衡解離常數(shù)KD在μM級(jí)別

圖2. Incucyte® 結(jié)果顯示：如果USP7或者P53基因突變后（圖2c, 2d左），BC對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖抑制能力減弱了（相對(duì)圖2d右），進(jìn)一步說明BC的機(jī)制特異性；每隔六個(gè)小時(shí)拍攝一次，每次拍攝四個(gè)視野計(jì)算細(xì)胞匯合度

CAR–T細(xì)胞療法在實(shí)體瘤的治療上仍需進(jìn)一步優(yōu)化。本文開發(fā)了一種新型的強(qiáng)效和持久的CAR（嵌合抗原受體），它整合了T和NK細(xì)胞共刺激因子TMIGD2的結(jié)構(gòu)域，以及針對(duì)B7-H3（一個(gè)在實(shí)體腫瘤表達(dá)的免疫檢查點(diǎn)）的IgV結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體。在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，相較于第二代和第三代共刺激因子CAR，B7-H3.TMIGD2的CAR-T細(xì)胞顯示出更優(yōu)越的抗腫瘤活性、存活率和持久性。從機(jī)制上看，B7-H3.TMIGD2 CAR-T細(xì)胞能夠維持線粒體代謝，產(chǎn)生較少的細(xì)胞因子，并建立較少的耗竭細(xì)胞、更多的中央記憶細(xì)胞，以及更高的CD8/CD4 T細(xì)胞比例。這為實(shí)體瘤的治療提供了新的可能性和希望。在本研究中，Octet® 是抗體篩選的主要手段，而Incucyte® 則是體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要手段之一。

表1. 用Octet® 篩選出單克隆抗體8B12，其與B7-H3的親和力更強(qiáng)

圖3. Incucyte® 結(jié)果顯示：B7-H3.TMIGD2 CART對(duì)腫瘤細(xì)胞系U118，HCC827的殺傷作用；每隔4個(gè)小時(shí)拍著一次，一共拍攝112個(gè)小時(shí)

Integrin α5β1在細(xì)胞附著和遷移過程中起著至關(guān)重要的作用，尤其是在發(fā)育和組織再生過程中。所以，針對(duì)α5β1的結(jié)合蛋白在再生醫(yī)學(xué)和下一代治療領(lǐng)域具有巨大的潛力。利用計(jì)算蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)技術(shù)，研究人員成功創(chuàng)建了名為NeoNectins的α5β1特異性結(jié)合微蛋白。這些NeoNectins能夠與α5β1結(jié)合并穩(wěn)定其開放狀態(tài)，從而優(yōu)化其功能。將NeoNectins固定在鈦表面和3D水凝膠中時(shí)，發(fā)現(xiàn)它們?cè)诖龠M(jìn)細(xì)胞附著和擴(kuò)展方面，表現(xiàn)優(yōu)于天然纖維連接蛋白和RGD肽。此外，在動(dòng)物模型中，NeoNectin涂層的鈦植入物在促進(jìn)組織整合和骨生長方面，也顯著優(yōu)于纖維連接蛋白和RGD涂層的植入物。無論是作為治療劑、細(xì)胞培養(yǎng)基還是組織修復(fù)材料，NeoNectins都有可能為未來的醫(yī)學(xué)研究和治療帶來革命性的變化。在本研究中，Octet® 被用來結(jié)合微蛋白與靶點(diǎn)在不同條件下的結(jié)合能力，Incucyte® 則用來檢測細(xì)胞遷移速度。

圖4. Octet® 檢測NeoNectins與α5β1的親和力（圖4A），兩者親和力在pH5的時(shí)候親和力降低（圖4B），如果分析緩沖液中去掉鈣鎂離子，則幾乎沒有結(jié)合（圖4C）

圖5. Incucyte® 檢測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡，發(fā)現(xiàn)加入NeoNectins后，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度變低

當(dāng)人體缺乏維生素B12時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致一系列神經(jīng)缺陷，包括協(xié)調(diào)能力的喪失和認(rèn)知能力的下降。本文利用可編程噬菌體展示技術(shù)，在一位出現(xiàn)進(jìn)行性震顫和共濟(jì)失調(diào)的患者中，識(shí)別出了一種針對(duì)CD320的自身抗體。這種自身抗體通過耗盡細(xì)胞表面的B12受體CD320，在體外實(shí)驗(yàn)中阻礙了B12的攝取。盡管該患者的血清中維生素B12的濃度正常，但在她的腦脊液（CSF）中，B12幾乎無法檢測到。接受免疫抑制治療和B12補(bǔ)充治療后，該患者的腦脊液中B12水平有所升高，且臨床狀況得到改善。這一發(fā)現(xiàn)提示，通過針對(duì)自身抗體和營養(yǎng)補(bǔ)充的治療，可能有助于改善由維生素B12缺乏引起的神經(jīng)系統(tǒng)問題。在本研究中，Octet® 被用來驗(yàn)證抗體的結(jié)合，而文中大量的B12攝入實(shí)驗(yàn)是通過Incucyte® 完成的。

圖6. Octet® 結(jié)果顯示：病人中分離的CD320的自身抗體與CD320的多肽結(jié)合，但是不與突變的CD320多肽結(jié)合

圖7. Incucyte® 檢測細(xì)胞對(duì)B12的攝入。加入病人腦脊液（CSF）或者CD320抗體，B12的攝入量變低（D圖）。對(duì)腦脊液中的CD320抗體進(jìn)行去除或者富集，分別可以增加或者抑制B12的攝入（E圖）。

Incucyte® 的主要優(yōu)勢

• 培養(yǎng)箱內(nèi)可長達(dá)數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對(duì)細(xì)胞的傷害

• 多個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高

• 具有劃痕、腫瘤球、類器官、趨化、血管生成等多個(gè)分析拍攝模塊，并配套相應(yīng)的耗材

• 高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)，使得結(jié)果更加準(zhǔn)確

• 大于100種優(yōu)化過的活細(xì)胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol

• 文章數(shù)>15,000篇，認(rèn)可度廣

Octet® 的主要優(yōu)勢

• 非標(biāo)記Direct Binding是趨勢，它的結(jié)果更準(zhǔn)確

• 快速測定親和力，更加定量化對(duì)互作進(jìn)行表征

• 無洗滌步驟，可測弱親和力（解離快）

• 測試時(shí)間短，一般10-20分鐘，更快拿到結(jié)果

• 實(shí)驗(yàn)形式多樣化：定性，兩者結(jié)合，協(xié)同/競爭實(shí)驗(yàn)，垂釣

• 寫入了美國藥典，文章>15,000篇，認(rèn)可度廣

• 萬金油技術(shù)，可以用與檢測DNA、小分子、蛋白等各種生物分子

• 使用方便，成本相對(duì)低

鎖定Octet® 和Incucyte® 這對(duì)CP，讓您的文章更上一層樓！

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