乳糖含量試劑盒說(shuō)明書
HPLC 法 50 管/48 樣
測(cè)定意義：
乳糖存在于哺乳動(dòng)物的乳汁中，一分子乳糖消化可得一分子葡萄糖和一分子半乳糖。半乳糖
能促進(jìn)腦苷脂類和黏多糖類的生成，對(duì)幼兒智力發(fā)育具有重要作用。
測(cè)定原理：
利用示差折光檢測(cè)器測(cè)定乳糖含量。
需自備的實(shí)驗(yàn)用品：
液相色譜儀、示差折光檢測(cè)器、低速離心機(jī)、溶劑抽濾裝置、超聲波清洗器、針頭式過
濾器（水系，50 個(gè)，0.22μm）、濾膜（水系1 個(gè)，0.45μm）、鈣柱（Carbomix Ca-NP10，7.8
×300 mm）、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個(gè)，2mL）、超純水。
試劑的組成和配制：
乳糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg×1 支，4℃保存。
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：
1、將新鮮的超純水2000 mL 用0.45 μm 的水系濾膜抽濾，以除去溶劑中的雜質(zhì)，防止堵塞
色譜柱，之后用超聲波清洗器超聲20 分鐘，以脫去溶劑中的氣泡。
乳糖的提?。?br />1、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：超純水體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.2 g
組織，加入2mL 超純水），勻漿，倒入2mLEP 管中，8000g 4℃離心10 min，取上清液，調(diào)
PH 值至5-9，水系針頭式過濾器過濾后待測(cè)。
2、液體樣品：取2mL 液體樣品，調(diào)PH 至5-9，水系針頭式過濾器過濾后待測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品的配制：
在標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶中加入10mL 超純水，配成10mg/mL 母液，將母液用超純水分別稀釋成10
mg/mL、8mg/mL、6 mg /mL、4 mg /mL 和2 mg /mL 的乳糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。水系針頭式過濾器
過濾后待測(cè)。
乳糖含量測(cè)定操作步驟：
1．開啟電腦、泵、檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器，用超純水沖洗儀器，沖洗體積為100mL，必須保
證整個(gè)線路中充滿水，不能把有機(jī)相帶入色譜柱。
2．安裝上色譜柱，放入柱溫箱，設(shè)置流速0.2 mL/min，沖洗5min后，設(shè)置柱溫為85℃，待
溫度升到所需溫度后，逐漸提高流速至0.6mL/min，并注意柱壓不超過zui高1000psi。
3．設(shè)置進(jìn)樣量10 μL，流速0.6 mL/min，保留時(shí)間15min。待流速達(dá)到0.6mL/min 后，查看
基線。
4. 待基線穩(wěn)定后上樣檢測(cè)，先加入標(biāo)準(zhǔn)品10 μL，乳糖的保留時(shí)間在10min 左右，（儀器和
檢測(cè)環(huán)境不同，保留時(shí)間有差異），計(jì)算不同濃度的乳糖標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積；加入樣品10 μL，
在相應(yīng)保留時(shí)間處檢測(cè)乳糖的峰面積。
5. 測(cè)定結(jié)束后，調(diào)整流速為0.2mL/min，關(guān)閉柱溫箱的加熱系統(tǒng)；待柱溫降到40℃以下，
停止流動(dòng)相。

乳糖含量的計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)計(jì)算乳糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品峰面積代入
標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品乳糖含量。
注意事項(xiàng)：
1.CarbomixCa-NP柱的pH適用范圍是5-9。如使用了超出上述pH范圍的流動(dòng)相，將可能對(duì)色
譜柱造成不可修復(fù)的損傷。如分析酸性樣品，則務(wù)必在進(jìn)樣前對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，以保證其
pH在5-9的中性范圍內(nèi)，方可進(jìn)樣。
2.標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍要根據(jù)樣品中乳糖濃度確定，樣品中乳糖的峰面積必須落在不同濃度的
乳糖標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積之內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)品稀釋倍數(shù)只是一個(gè)參考。