材料與試劑 1.抗凝劑 (1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其鈉鹽或鉀鹽,它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶,進(jìn)而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白,從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml,市售肝素多為100U~126U/mg。 (2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4%的溶液備用。 (3)阿氏液(Alsever液),配方如下:枸櫞酸鈉(Na3C6H5O7·5H2O) 0.80g 枸櫞酸 0.0325g 葡萄糖 2.05g 氯化鈉 0.42g H2O 加至 100.00ml 混勻溶解后,114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。 阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑,又含有細(xì)胞生存的營養(yǎng),所以它既可做抗凝劑,又可做血細(xì)胞的保存液。 2.針頭 根據(jù)不同動物和采血部位,采用不同型號的針頭,用前必須滅菌或消毒。 3.采血容器注射器或三角瓶等。 4.采血動物。 操作方法 1.采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血,豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血,家禽由翼下靜脈或心臟采血,兔由心臟或耳靜脈采血,犬由頸靜脈或四肢靜脈采血,豚鼠由心臟采血,小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。 2.抗凝 采集血液zui關(guān)鍵的問題是抗凝,采用什么方法進(jìn)行抗凝,則根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求和條件而定。zui常用的方法如下: (1)肝素抗凝:采血時,使每ml血液含15U~20U肝素即可。計(jì)算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血時,邊采血邊輕輕搖動,使抗凝劑和血液混勻。對于采少量的血液或小動物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。 (2)EDTA抗凝:采血前,用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4%溶液,然后按預(yù)采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內(nèi)。采血,并不斷搖動采血容器,使之混勻。 (3)玻璃珠法:預(yù)先將適量的玻璃珠(根據(jù)采血量多少而定)清洗后,裝入采血容器中,滅菌后備用。采血過程中,邊采邊搖采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滾動,以機(jī)械地除去纖維蛋白,使血液不能凝固。本法雖較麻煩,但對淋巴細(xì)胞的活性影響zui小,且可減少血小板的混雜。 (4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,邊采邊輕輕搖動采血瓶,使之混勻。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于紅細(xì)胞的保存。一般在4℃條件下,阿氏液中保存的紅細(xì)胞2周其活性和特性不變 |
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