目錄:北京博蕾德科技發(fā)展有限公司>>Biolead>>試劑盒>> 細(xì)胞增殖/毒性檢測試劑盒CCK8
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更新時(shí)間:2024-07-18 11:05:28瀏覽次數(shù):1938評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100次 |
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貨號(hào) | BL025-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測 |
細(xì)胞增殖-毒性檢測試劑盒 Cell Counting Kit-8(CCK-8/CCK8)
產(chǎn)品簡介:
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒,為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽) ,是用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
水溶性四唑(2-(2-甲氧基-4硝基ben)-3-(4-硝基ben)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的甲臜染料(formazan,下圖), 這種甲臜染料直接溶解在培養(yǎng)基中。水溶性四唑被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠。細(xì)胞增殖越多越快,則培養(yǎng)基的顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。正是利用這一特性開發(fā)的CCK-8試劑盒直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8法應(yīng)用非常廣泛,可以用于生物活性因子的活性檢測,抗腫瘤藥物的篩選,細(xì)胞增值的測定,細(xì)胞毒性檢測以及藥敏等與細(xì)胞活性和增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。本試劑盒使用方便,試劑盒包含一管已經(jīng)配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即開即用,無需其他準(zhǔn)備步驟。檢測過程也無需采用額外的步驟去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶標(biāo)儀上檢測,適合大規(guī)模高通量的樣品檢測。
CCK-8法與MTT比較:
CCK8試劑盒提供了一種靈敏度高,操作簡便,使用安全,重現(xiàn)性好的細(xì)胞增殖與活性檢測方法。與傳統(tǒng)的MTT相比無需有機(jī)溶劑和放射性同位素,步驟少,無損失,結(jié)果準(zhǔn)確!本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,無須再進(jìn)行任何配制等操作 。無須使用同位素,所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞,不必收集細(xì)胞,也不必采用額外的步驟去溶解formazan??梢杂糜诖笈繕悠返臋z測。
1.MTT實(shí)驗(yàn)生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解;而本方法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,不僅省去了溶解的步驟,更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。
2.與MTT方法相比,本方法線性范圍更寬,靈敏度更高。本方法對(duì)細(xì)胞無毒性,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)多次測定從而找到較佳測定時(shí)間。
3.本方法所用試劑在培養(yǎng)基中比MTT更加穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)效果重復(fù)性好。
4.MTT具有毒性,同時(shí)其生成的甲臜需要有機(jī)溶劑溶解,會(huì)對(duì)操作人員身體造成危害。本試劑無毒,使用中無需有機(jī)溶劑,操作更加安全。
5.本試劑盒在4℃避光可長期保存,使用無需配制,即開即用。
6.酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測不會(huì)造成干擾(扣除空白孔即可)
產(chǎn)品訂購:
品牌 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
Biolead | BL025-100 | 100T | 168 |
Biolead | BL025-500 | 500T | 588 |
Biolead | BL025-1000 | 1000T | 1080 |
Biolead | BL025-3000 | 3000T | 1680 |
常見問題與解答:
Q1.設(shè)定參比波長的目的是什么?必須要設(shè)定嗎?
A1.不一定要設(shè)定。 CCK-8試劑在參比波長處沒有吸光度。設(shè)定參比波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。
Q2.如何設(shè)定空白對(duì)照?
A2.在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn) (細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)) 時(shí),還應(yīng)考慮藥物的吸收,可在不含細(xì)胞,加入藥物的培養(yǎng)基中測定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。
Q3.在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)測定是否有影響?如何解決?
A3.有時(shí)會(huì)有影響。如果藥物具有氧化還原性,會(huì)和CCK-8發(fā)生反應(yīng),吸光度發(fā)生變化。解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度,如果它的吸光度與不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度相比有明顯變化,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。
Q4.不更換培養(yǎng)基加CCK-8試劑,有沒有問題?
A4.一般沒有問題。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質(zhì)的話,可能會(huì)產(chǎn)生誤差,必須更換其他培養(yǎng)基。我以下培養(yǎng)基會(huì)影響測定:培養(yǎng)基IMDM的空白吸收1.0;培養(yǎng)基McCoy/s的空白吸收0.3。
Q5.哪些物質(zhì)會(huì)影響CCK-8的測定?
A5.當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK-8的測定,增加O.D.值;在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)抑制測定反應(yīng)的發(fā)生,減小O.D.值;在有酚紅存在的情況下,會(huì)增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可;血清不影響測定。
Q6.說明書上僅寫了96孔板的測定方法,如果使用24孔板或12孔板,應(yīng)該加多少量CCK-8試劑?
A6.一般情況下建議加入CCK-8試劑的量是培養(yǎng)基體積的1/10.
Q7如何減少由于CCK-8試劑在槍頭或者孔壁上的殘留所帶來的誤差 ?
A7.可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。
Q8.每次測定的O.D值不一樣,是什么原因?如何解決?
A8.可能會(huì)有以下幾個(gè)原因:
1.當(dāng)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)板較外一圈的孔較容易干燥揮發(fā),導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣,從而增加誤差。一般情況下,較外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測定孔用。
2.有可能會(huì)因?yàn)?/span>CCK-8沾在壁上而產(chǎn)生誤差,建議在加入CCK-8后,輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。
3.每孔的細(xì)胞數(shù)量過多或過少。請(qǐng)預(yù)先在1000-100000個(gè)/孔范圍內(nèi)摸索條件。
Q9.在CCK-8顯色過程中,如何終止反應(yīng)? A9. 有以下幾種方法:注意: 反應(yīng)停止后, 應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)測定。
1)每孔加10ul0.1M HCI溶液。2)在顯色反應(yīng)后,將培養(yǎng)板放入4℃冰箱內(nèi)。3)每孔加10ul 1%(w/v)的SDS(十二烷基磺酸鈉)溶液。
Q10.在實(shí)驗(yàn)中吸光度值太高,如果不能減少細(xì)胞數(shù)量,如何解決?
A10.縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。
Q11.必須預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞嗎?
A11.不一定。如果要想保持細(xì)胞的較好狀態(tài),建議預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞。如果不做細(xì)胞的預(yù)培養(yǎng),細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶可能會(huì)不穩(wěn)定。也有研究人員不做細(xì)胞預(yù)培養(yǎng),但在做標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測時(shí)需要統(tǒng)一檢測條件。
Q12.如果加入的藥物中有金屬,是否會(huì)有影響?
A12.金屬對(duì)CCK-8顯色有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、Fecl3、硫酸銅會(huì)抑制5%、15%、90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,將會(huì)100%抑制。
Q13.CCK-8的保質(zhì)期有多久?
A13.CCK-8在避光0-5℃的條件下可以存放1年,在-20℃下避光可以保存2年。如果需要長期保存,我們推薦在-20℃儲(chǔ)藏。正常的CCK-8顏色為淺粉色,如有明顯顏色變化,則CCK-8的質(zhì)量有可能發(fā)生變化。CCK-8若反復(fù)凍融有可能會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果,若短時(shí)間頻繁使用可將試劑存放在4℃冰箱內(nèi)保存。
Q14.預(yù)培養(yǎng)后,更換培養(yǎng)基需要細(xì)胞計(jì)數(shù)嗎?
A14.一般情況下用胰蛋白酶處理對(duì)數(shù)增長期的細(xì)胞,用血球計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù),制備成一定濃度的細(xì)胞懸液即可。如果想要精確計(jì)數(shù)細(xì)胞,可以預(yù)培養(yǎng)后去培養(yǎng)基用血球計(jì)數(shù)盤進(jìn)行計(jì)數(shù)。
Q15.CCK-8是否對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色?
A15.CCK-8不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。培養(yǎng)基中的CCK-8并不進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)染色細(xì)胞,而是在電子載體的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為高度水溶性的黃色甲臜染料,是一個(gè)顯色反應(yīng)。顯色反應(yīng)后,更換新的培養(yǎng)基,可以繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。
Q16.CCK-8對(duì)于不同的細(xì)胞,靈敏度是否一樣?
A16.不同細(xì)胞的脫氫酶活性不一樣,顯色程度不一樣,靈敏度也不一樣。
Q17.懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞在接種數(shù)量上有何區(qū)別?
A17.大部分懸浮細(xì)胞相比貼壁細(xì)胞比較難顯色,O.D.值偏低,一般需要增加細(xì)胞接種數(shù)量或延長加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。貼壁細(xì)胞顯色比較容易,若細(xì)胞數(shù)量過大,有時(shí)吸光度會(huì)超過酶標(biāo)儀的讀數(shù)。
Q18.應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎?
A18.建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的,但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞,建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果試劑的批號(hào)不一樣,靈敏度可能會(huì)有輕微的差異,對(duì)于不同的批號(hào)建議分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Q19.有時(shí)在藥物作用情況下,細(xì)胞已經(jīng)死亡,但是脫氫酶的活性還在,是否能計(jì)算細(xì)胞數(shù)量?
A19.不能。由于CCK-8是通過和細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶進(jìn)行反應(yīng)間接反映活細(xì)胞數(shù)量,如果細(xì)胞已經(jīng)死亡,但脫氫酶的活性還在,則實(shí)際測定的活細(xì)胞數(shù)量將會(huì)比真實(shí)值高,不能真實(shí)反應(yīng)活細(xì)胞數(shù)量,建議采用別的方法測定。
Q20.CCK-8是什么顏色?
A20.應(yīng)該是粉紅色。若顏色不一樣,有可能會(huì)影響測定。
Q21.導(dǎo)入基因后,是否用CCK-8來檢測活細(xì)胞?
A21.可以
Q22.在pH5的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,是否可以用CCK-8試劑檢測?
A22.理論上可以的,但是需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)一步確定。
Q23.O.D.值在什么范圍比較合適?
A23.一般情況下O.D.值在0.1-2.0范圍內(nèi)都可以,在1.0附近較好。
Q24.細(xì)菌是否會(huì)和CCK-8試劑發(fā)生反應(yīng)?
A24.CCK-8不會(huì)和細(xì)菌發(fā)生顯色反應(yīng)。細(xì)菌防御系統(tǒng)強(qiáng),不會(huì)發(fā)生還原反應(yīng)
Q25.CCK-8試劑用于測定活細(xì)胞的數(shù)量,對(duì)于增殖期的細(xì)胞和靜止期的細(xì)胞,有何影響?A25.一般情況下CCK-8試劑用于檢測對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞。如果靜止期細(xì)胞的脫氫酶活性和增殖期的細(xì)胞的脫氫酶活性有很大的 不同的話,則兩者會(huì)有很大的差別。
Q26.如果O.D.值太低,可以采取什么辦法?
A26.兩個(gè)辦法:1)適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量; 2)延長加入CCK-8后的反應(yīng)時(shí)間。
Q27.在做藥物毒性實(shí)驗(yàn)時(shí),加入CCK-8培養(yǎng)一段時(shí)間后,檢測時(shí)顏色沒有變化,樣品和空白O.D.值一樣,是何原因?
A27.可能因素有2個(gè):藥物的濃度太高,細(xì)胞全部被殺死;如果藥物有氧化性,則會(huì)抑制CCK-8試劑的顯色反應(yīng),可以采取先更換培養(yǎng)基清洗掉藥物,然后再加CCK-8試劑進(jìn)行檢測的方法。
Q28.如何避免細(xì)胞聚團(tuán)現(xiàn)象?
A28. 1) 消化時(shí)間長一些。2) 細(xì)胞培養(yǎng)好后,手搖或設(shè)備搖勻。3)用槍頭反復(fù)吹打,但要避免產(chǎn)生氣泡。
Q29.做懸浮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)時(shí),檢測幾天比較合適?
A29.由于不更換培養(yǎng)基長時(shí)間的培養(yǎng),培養(yǎng)基中的氧氣和營養(yǎng)會(huì)流失,會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)。建議培養(yǎng)4-5天左右,但要確定細(xì)胞數(shù)量是否已經(jīng)達(dá)到飽和?如果需要長時(shí)間培養(yǎng),因?yàn)槿菀渍舭l(fā),建議培養(yǎng)板的邊緣孔不加細(xì)胞。
Q30.如何制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?
A30.先取已知細(xì)胞數(shù)量的細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)板中,然后用培養(yǎng)基一次等比例稀釋成一個(gè)系列濃度的細(xì)胞懸液,細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后加CCK-8試劑,培養(yǎng)一段時(shí)間,等顏色發(fā)生明顯變化后,用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定,以細(xì)胞數(shù)量為X軸,O.D.值為Y軸,就可以做成一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Q31.細(xì)胞數(shù)量太多會(huì)有什么結(jié)果?
A31.貼壁細(xì)胞如果接種太多,細(xì)胞在培養(yǎng)過程中容易長滿而產(chǎn)生互相擠壓的現(xiàn)象,導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好或者死亡。另外細(xì)胞接種太多容易產(chǎn)生O.D.值過高(甚至于超過儀器的檢測范圍)的情況。
Q32.BrdU法和CCK-8法有何區(qū)別?
A32.CCK-8法師通過檢測對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶來反映細(xì)胞的活性,而BrdU法是檢測細(xì)胞的DNA合成。CCK-8法只需要加入知己,通過比色法就可以檢測,而BrdU法不僅要加入試劑,而且要固定細(xì)胞,通過抗原抗體反應(yīng)之后用發(fā)光法來檢測。兩者的原理是*不同的。如果只是檢測細(xì)胞增殖的話,那么CCK-8的方法是比較簡單的。
Q33.在做藥物毒性實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)細(xì)胞有抑制作用,但檢測結(jié)果卻是O.D.值升高,為什么?
A33.很可能藥物和CCK-8試劑發(fā)生了反應(yīng),可以做一個(gè)只加藥物的空白對(duì)照,如果O.D.值確實(shí)比正常的空白對(duì)照O.D.值高很多,則說明藥物和CCK-8試劑發(fā)生了反應(yīng)??梢酝ㄟ^更換培養(yǎng)基清洗掉藥物的辦法解決。
Q34.加入CCK-8試劑后,為什么在不同時(shí)間檢測的值不一樣(例如在3小時(shí)和在3.5小時(shí))? A34.由于CCK-8試劑和細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶反應(yīng)是一個(gè)循環(huán)反應(yīng),隨著時(shí)間的增加,O.D.值也會(huì)不斷增加,顏色會(huì)不斷加深,但細(xì)胞數(shù)量卻沒有什么太大變化。一般情況下建議在確定較佳的實(shí)驗(yàn)條件(合適的時(shí)間、合適的O.D.值)后,把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間固定下來,以后在同樣的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。
Q35.組內(nèi)數(shù)據(jù)差異比較大或組間數(shù)據(jù)雜亂,沒有規(guī)律,是何原因?
A35.原因有可能是CCK-8試劑在移液槍的槍頭上或培養(yǎng)板的孔壁上殘留,加入時(shí)較好快速加入以避免殘留,可以用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑的辦法來降低誤差:用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑1倍,混勻后每孔加20ul使用。
Q36.用CCK-8試劑做細(xì)胞毒性檢測時(shí):1)貼壁細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)多長時(shí)間合適?2)預(yù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂,如何計(jì)算細(xì)胞數(shù)量?3)如果預(yù)培養(yǎng)時(shí)間太長,會(huì)有什么結(jié)果?
A36. 一般情況下建議貼壁細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)的時(shí)間為24h. 如果只計(jì)算藥物的LD50值的話,可不必考慮預(yù)培養(yǎng)過程中的細(xì)胞分裂問題,但要做一個(gè)加細(xì)胞的對(duì)照(該值為較大值)。 如果預(yù)培養(yǎng)時(shí)間太長,有可能細(xì)胞會(huì)增長過多,達(dá)到飽和狀態(tài),O.D.值將會(huì)很高,甚至?xí)^儀器的檢測范圍。
Q37.在實(shí)驗(yàn)中加入刺激細(xì)胞增長的因子,但是細(xì)胞數(shù)量卻沒有增加(或者吸光值沒有上升),為什么?
A37.首先用顯微鏡觀察一下,確定細(xì)胞數(shù)量是否增加?然后才考慮其他的因素(如果加入的刺激因子和CCK-8發(fā)生反應(yīng)的話,吸光值不變這種可能性是非常低的)。如果顯微鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量確實(shí)增加了,則請(qǐng)檢查加入的藥物是否具有氧化性?有可能抑制了CCK-8試劑的反應(yīng)。方法是:在有細(xì)胞的培養(yǎng)基中做1個(gè)加藥物和不加藥物的對(duì)比,然后分別加入CCK-8試劑進(jìn)行檢測,如果不加藥物的O.D.值比加藥物的O.D.值高,則說明藥物確實(shí)具有氧化性,產(chǎn)生了干擾。
Q38. Cell Counting Kit-8法實(shí)驗(yàn)中每孔應(yīng)該接種多少細(xì)胞?
A.38貼壁細(xì)胞每孔至少需要接種1,000個(gè)細(xì)胞 (100 mL的培養(yǎng)基),檢測白細(xì)胞時(shí)由于它的靈敏度較低,每孔至少需要接種2,500個(gè)細(xì)胞 (100 mL的培養(yǎng)基),建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量。如果要使用24孔板或是6孔板實(shí)驗(yàn),請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
Q39. 哪些物質(zhì)會(huì)影響CCK-8的測定?
A39. 當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK-8的測定,增加OD值,例如含有維生素C的Glucose等 (一般培養(yǎng)基中的量不多,酚紅或血清不影響測定 )。在有酚紅存在的情況下,會(huì)增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可。
Q40. 在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)測定是否有影響?如何解決?
A40有時(shí)會(huì)有影響。如果藥物具有還原性,會(huì)和CCK-8試劑發(fā)生顯色反應(yīng),增加吸光度。解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基 (只加CCK-8) 的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。
Q41. CCK-8對(duì)細(xì)胞是否有毒?
CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性相當(dāng)?shù)汀?/span> CCK8溶液自身因?yàn)楦邼舛鹊?/span>1Methoxy PMS的存在而具有一點(diǎn)毒性。但是,加到培養(yǎng)基中的CCK8是沒有毒性的,因?yàn)楸幌♂屃?/span>10倍。因此,長時(shí)間的培養(yǎng),如過夜或者培養(yǎng)數(shù)天是可以的。同一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液在CCK8檢測后還可以用于其他細(xì)胞增殖檢測,如結(jié)晶紫檢測,中性紅檢測或者DNA熒光檢測等。由于每種細(xì)胞對(duì)于CCK8的耐受力都不同,因此在需要進(jìn)行長時(shí)間培養(yǎng)時(shí),先檢測一下細(xì)胞在加入CCK8培養(yǎng)后的活力。
Q42.. Cell Counting Kit-8試劑穩(wěn)定嗎?
A42. CCK-8在避光0~5℃的條件下可以存放1年,在-20度下避光可以保存2年。反復(fù)解凍和冰凍將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果,若經(jīng)常使用可將試劑存放在4℃冰箱內(nèi)保存。 在常溫下可以保存3周左右,顏色應(yīng)該為淺紅色,如果顏色發(fā)生改變,則可能會(huì)增加空白吸光度。
Q43. 我沒有450 nm的濾光片,還可以使用哪些其他的濾光片?
A43可以使用吸光度在430~490 nm之間的濾光片,但是450 nm濾光片的檢測靈敏度較高。
Q44. CCK-8能否對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色?
A44不能。因?yàn)?/span>CCK-8的主要成分是一種水溶性的四唑鹽,并通過電子載體將活細(xì)胞中的電子交換到培養(yǎng)基中的CCK上,因?yàn)?/span>CCK及其生成的甲瓚染料是高度水溶性的,不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),所以CCK-8不能對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色。
Q45. 如果OD值太低,可以采取什么辦法?
可以采取2個(gè)辦法: 適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量和 延長加入CCK試劑后的染色時(shí)間。
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