Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品原理

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性相關(guān)實驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。

CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯

基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8 是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（Formazan，參考圖1)。

Water Soluble Tetrazolium-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。活細(xì)胞的數(shù)目越多，則顏色越深。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

產(chǎn)品優(yōu)點

本試劑盒提供了一種靈敏度高、操作簡便、使用AN全的細(xì)胞增殖與活性檢測方法。與傳統(tǒng)的MTT 法相比具有明顯的優(yōu)勢：

1. MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解；而 CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來的實驗誤差。

2. 由于CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，無需吸掉培養(yǎng)基后，再用DMSO 等有機溶劑溶解，非常適合用于懸浮細(xì)胞的活性測定。

3. 與MTT  方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。

4. CCK-8 法對細(xì)胞無毒性，可以多次測定，選取*測定時間。 

5. CCK-8 法無需配制，即開即用。

6. CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測。

使用方法

1. 在96 孔板中配制100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時（在37℃，5% CO2 的條件下）。

2. 向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測yao物進(jìn)行處理。

3. 根據(jù)實驗需要，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時間（例如：6, 12，24 或48 小時）。

注：如果不進(jìn)行yao物處理而直接測定細(xì)胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。

4. 向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。 

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2-4 小時。

6. 用酶標(biāo)儀測定在450 nm 處的吸光度。

7. 如果暫時不測定OD 值，可以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v）溶液或者0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養(yǎng)板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

注意事項 

1. 由于96 孔板周圍一圈zui容易蒸發(fā)，周圍一圈建議不用，改加PBS 或水。

2. CCK-8 檢測細(xì)胞活性的原理是通過檢測活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)。如果待測體系中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會干擾檢測結(jié)果，需設(shè)法去除其影響。 

3. 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時，貼壁細(xì)胞的zui小接種量至少為1,000 個/孔(100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔(100 μL 培養(yǎng)基)，且加入CCK-8 后孵育的時間長一些。 

4. 如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8  檢測。 

5. 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底的吸光度而消除，因此不會對檢測結(jié)果造成影響。

儲存條件：本試劑盒在在-20℃至少可以保存 3 年，4℃只能保存數(shù)月。建議收到產(chǎn)品后，放-20℃冰箱冷凍保存。*使用時，室溫融化后，建議按自己實驗需要，分裝到mie菌離心管（比如 1 mL/管），繼續(xù)放-20℃冰箱冷凍保存。每次實驗時，按需從-20℃冰箱取出相應(yīng)數(shù)量的試劑，室溫融化后使用。

本產(chǎn)品經(jīng)測試：5 次左右的反復(fù)凍融，對產(chǎn)品質(zhì)量幾乎沒有任何影響。如果4℃放置的時間超過半年，對實驗的影響相對較大。