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懷菊花中活性物質(zhì)的閃式提取與HPLC測定
懷菊花中活性物質(zhì)的閃式提取與HPLC測定
王夏青 1，劉延澤2，盧付軍2，鄭秀明2，趙余慶3*
（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110032；2.河南金鼐科技發(fā)展有限公司，河南 鄭州 450016；
3.沈陽藥科大學(xué)，遼寧 沈陽 110016）
摘要 本文采用閃式技術(shù)對懷菊花活性物質(zhì)綠原酸進(jìn)行了提取工藝的比較（超聲及藥典法）和HPLC檢測，優(yōu)選了懷菊花的閃式提取工藝。
關(guān)鍵詞 懷菊花；閃式提?。?/span>HPLC
菊花為常用傳統(tǒng)中藥，來源于菊科植物Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。其味甘苦,性涼，具有散風(fēng)清熱，平肝明目之功效。主要用于風(fēng)熱感冒，頭痛眩暈，目赤腫痛，眼目昏花等癥[1]。菊花的有效成分為綠原酸和黃酮類，綠原酸已經(jīng)被證明有抗菌和抗炎作用。2005年版中國藥典采用HPLC法測定綠原酸的含量作為菊花質(zhì)量的內(nèi)控指標(biāo)[2]。
閃式提取技術(shù)是一種利用閃式提取器對于植物軟、硬材料快速提取的新型提取技術(shù)。由于完成一次提取一般在1-3分鐘左右，比傳統(tǒng)方法更快速、簡便，故被稱之為閃式提取。其原理是依靠機(jī)械剪切力和超動分子滲濾技術(shù)，在室溫及溶劑存在下數(shù)秒鐘內(nèi)將植物的根、莖、葉、花、果實(shí)等物料破碎至細(xì)微顆粒，并使有效成分迅速達(dá)到組織內(nèi)外平衡，通過過濾達(dá)到提取的目的。閃式提取技術(shù)能夠避免植物有效成分受熱破壞，具有溶劑用量小，提取時(shí)間短，效率高等特點(diǎn)[3]，是一種新興的中藥現(xiàn)代化提取關(guān)鍵技術(shù)。
本研究以菊花中綠原酸為檢測指標(biāo)，對懷菊花進(jìn)行傳統(tǒng)提取方法及閃式提取法的比較，并依據(jù)藥典及文獻(xiàn)方法對其中的綠原酸進(jìn)行了HPLC測定，優(yōu)選出懷菊花中綠原酸提取的*工藝。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
綠原酸對照品（中國藥品生物制品鑒定所，編號：110753-200413）；懷菊花購于河南；甲醇為色譜純；磷酸為色譜純；磷酸二氫鈉為色譜純；水為雙蒸水。
1.2 儀器
閃式提取器JHBE-50S（河南金鼐科技發(fā)展有限公司）；精密電子天平BS-124S(德國賽多利斯公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A（上海亞榮盛華儀器廠）；恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；數(shù)控超聲波清洗器KQ3200DB（昆山市超聲儀器有限公司）；北京創(chuàng)維液相色譜儀（UV3000紫外檢測器和色譜柱恒溫箱）；CXTH-3000色譜工作站；色譜柱Kromasil C18不銹鋼柱(4.6×250mm)。
1.3 色譜條件及試樣制備
1.3.1色譜條件
流動相為磷酸二氫鈉緩沖溶液：甲醇（70：30）（取磷酸二氫鈉15.6 g加水至1000 mL，制成0.1 mol·L-1的溶液，加入磷酸適量，使pH值為2.7；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長328 nm。
1.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。
樣品溶液制備
1.3.3試樣制備
基金項(xiàng)目：遼寧省天然藥物現(xiàn)代分離與工業(yè)化制備工程技術(shù)研究中心（2006-19-10）
*通訊作者：： , : zyq4885
1.3.3.1回流提取法:
取本品粉末（過一號篩）精稱1 g置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重，回流2h，放冷，補(bǔ)充損失的甲醇量，搖勻，濾過，濃縮至近干，殘?jiān)寐确?/span>5 mL浸漬3分鐘，棄去氯仿液，殘?jiān)鼡]去氯仿，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至1 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
1.3.3.2超聲提取法
取干燥的樣品適量1 g，精密加入甲醇50 mL，超聲提取30 min，放冷,補(bǔ)充損失的甲醇量，搖勻，濾過，濃縮至近干，殘?jiān)寐确?/span>5 mL浸漬3分鐘，棄去氯仿液，殘?jiān)鼡]去氯仿，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至1 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
1.3.3.3閃式提取法
考察三因素三水平，提取時(shí)間（A），A1=1 min，A2=2 min，A3=3 min；提取次數(shù)（B），B1=1次，B2=2次，B3=3次；液料比（C），C1=30:1，C2=50:1，C3=70:1。
1.3.4線性關(guān)系考察
精密吸取綠原酸對照品溶液0.1，0.2，0.4，1，2 μL，進(jìn)行測定。以峰面積為橫坐標(biāo)，含量為縱坐標(biāo)作圖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。其回歸方程為：y = 40.023x + 1.6465，r=0.9998。結(jié)果表明，綠原酸在0.1 μg～2 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積之間線性關(guān)系良好。
1.3.5精密度試驗(yàn)
精密吸取菊花閃提9號樣品10μL 同時(shí)進(jìn)樣3次，測定含量，記錄綠原酸峰面積，計(jì)算RSD％為2.24%，表明此標(biāo)準(zhǔn)曲線具有高的精密度。
1.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取閃提9號樣品按0，2，4，6，8 h進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算平均值，計(jì)算RSD％為2.62%，表明此方法在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
1.3.7重現(xiàn)性試驗(yàn)
取樣品4 g，按閃提法制備9號樣品的方法，平行制備5份供試品溶液，測定含量，記錄峰面積積分值，計(jì)算RSD％為1.52%，表明本方法重現(xiàn)性良好。
1.3.8加樣回收率試驗(yàn)
精密稱定已知含量的菊花，加入一定量的綠原酸對照品，吸取一定量，按上述條件測定峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算綠原酸對照品的量，RSD％為1.67%。
2 結(jié)果與討論
2.1 結(jié)果
菊花閃提*工藝為料液比（30：1）提3分鐘提3次 含量1.62%
表2-1菊花不同提取方法，提取物中綠原酸的含量（%）
提取方法 | 綠原酸的含量（%） |
回流提取 | 0.98 |
超聲提取 | 0.82 |
閃式提取 | 1.62 |
2.2 討論
利用閃式提取法提取懷菊花的有效成分，獲得了較高提取率的綠原酸。其含量約為回流和超聲提取法的2倍?？梢婇W式提取法顯示出與藥典記載方法和超聲法相比較具有多方面的優(yōu)勢。
首先，閃式提取器提取法具有提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，僅需幾分鐘，便可以達(dá)到率的快速提取，節(jié)省時(shí)間和能源，這是其它提取法無法實(shí)現(xiàn)的。
其次，傳統(tǒng)的提取方法一般需要長時(shí)間加熱提取，不利于一些熱敏性物質(zhì)的穩(wěn)定存在。而閃式提取器提取是在常溫下進(jìn)行的，對于藥材中有效成分的破壞極小，更適合于熱敏性物質(zhì)的提取。
綜上所述，閃式提取法是一種更為、節(jié)能、安全的全新的提取技術(shù)。
參考文獻(xiàn)
[1] 周志祥，魏俊德. 液相色譜法測定菊花中綠原酸含量的方法改進(jìn). .時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17(11)：:2221-2222
[2] 劉曉芳，馬新玉，周鋼. 中國藥典菊花綠原酸含量測定方法的探討. .新疆中醫(yī)藥，2006，,24(5)：78-79
[3] 劉延澤. 植物組織破碎提取法及閃式提取器的創(chuàng)制與實(shí)踐. 中國天然藥物，2007，5(6)：401-407.