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元析分光光度計由即光源、單色器、狹縫、樣品池,檢測器系統(tǒng)五部分組成。
一、元析分光光度計光源
要求能提供所需波長范圍的連續(xù)光譜,穩(wěn)定而有足夠的強度。常用的有白熾燈,氣體放電燈,金屬弧燈等多種。
鎢燈和鹵鎢燈發(fā)射320-2000nm連續(xù)光譜,zui適宜工作范圍為360-1000nm,穩(wěn)定性好,用作可見光分光光度計的光源。氫燈和氘燈能發(fā)射150-400nm的紫外結(jié),可用作紫外光區(qū)分光光度計的光源。紅外線光源則由納恩斯特(Nernst)棒產(chǎn)生,此棒由ZrO2:Y2O3=17:3(Zr為鋯,Y為釔)或Y2O3,GeO2(Ge為鈰)及ThO2(Th為釷)之混合物制成。汞燈發(fā)射的不是連續(xù)光譜, 能量絕大部分集中在253.6nm波長外,一般作波長校正用。鎢燈在出現(xiàn)燈管發(fā)黑時應(yīng)及更換,如換用的燈型號不同,還需要調(diào)節(jié)燈座的位置的焦距。氫粘及氘燈的燈管或窗口是石英的,且有固定的發(fā)射方向,安裝時必須仔細校正接觸燈管時應(yīng)戴手套以防留下污跡。
二、元析分光光度計分光系統(tǒng)
單色器是指能從混合光波中分解出來所需單一波長光的裝置,由棱鏡或光柵構(gòu)成。用玻璃制成的棱鏡色散力強,但只能在可見光區(qū)工作,石棱鏡工作波長范圍為185-4000nm,在紫外區(qū)有較好的分辯力而且也適用于可見光區(qū)和近紅外區(qū)。 棱鏡的特點是波長越短,色散程度越好,越向長波一側(cè)越差。所以用棱鏡的分光光度計,其波長刻度在紫外區(qū)可達到0.2nm,而在長波段只能達到5nm.有的分光光系統(tǒng)是衍射光柵,即在石英或玻璃的表面上刻劃許多平行線,刻線處不透光,于是通過光的干涉和衍射現(xiàn)象,較長的光波偏折的角度大,較短的光波偏折的角度小,因而形成光譜。
三、元析分光光度計狹縫
狹縫是指由一對隔板在光通路上形成的縫隙,用來調(diào)節(jié)入射單色光的純度和強度,也直接影響分辯力。狹縫可在0-2mm寬度內(nèi)調(diào)節(jié),由于棱鏡色散力隨波長不同而變化,較先進的分光光度計的狹縫寬度可隨波長一起調(diào)節(jié)。
四、元析分光光度計比色環(huán)
比爭環(huán)也叫樣品池,吸收器或比色皿,用來盛溶液,各個杯子壁厚度等規(guī)格應(yīng)盡可能*相等,否則將產(chǎn)生測定誤差。玻璃比色杯只適用于可見光區(qū),在紫外區(qū)測定時要用石英比色杯。不能用手指拿比色杯的光學(xué)面,用后要及時洗滌,可用溫水或稀鹽酸,乙醇以至鉻酸洗液(濃酸中浸泡不要超過15分鐘),表面只能用柔軟的絨布或拭鏡頭紙擦凈。
五、元析分光光度計檢測器系統(tǒng)
有許多金屬能在光的照射下產(chǎn)生電流,光愈強電流愈大,此即光電效應(yīng)。因光照射而產(chǎn)生的電流叫做光電流。受光器有兩種,一是光電池,二是光電管。光電池的組成種類繁多,zui常見的是硒光電池。光電池受光照射產(chǎn)生的電流頗大,可直接用微電流計量出。但是,當連續(xù)照射一段時間會產(chǎn)生疲勞現(xiàn)象而使光電流下降,要在暗中放置一些時候才能恢復(fù)。因此使用時不宜長期照射,隨用隨關(guān),以防止光電池因疲勞而產(chǎn)生誤差。
光電管裝有一個陰極和一個陽極,陰極是用對光敏感的金屬(多為堿土金屬的氧化物)做成,當光射到陰極且達到一定能量時,金屬原子中電子發(fā)射出來。光愈強,光波的振幅愈大,電子放出愈多。電子是帶負電的,被吸引到陽極上而產(chǎn)生電流。光電管產(chǎn)生電流很小,需要放大。分光光度計中常用電子倍增光電管,在光照射下所產(chǎn)生的電流比其他光電管要大得多,這就提高了測定的靈敏度。