XTerra色譜柱的前處理和操作使用
為確保XTerra™色譜柱具有最佳的性能，請遵守以下操作指導(dǎo):
a.保護(hù)柱
在進(jìn)樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)和顆粒大小都適合的保護(hù)柱對于保護(hù)分析柱至關(guān)重要。請選擇高性能的保護(hù)柱以便在保護(hù)分析柱的同時不會影響到分離效果。
保護(hù)柱需要定期更換，更換的周期主要取決于樣品的干凈程度。當(dāng)系統(tǒng)壓力上升至超過某個設(shè)定值或者突然出現(xiàn)色譜峰分叉的現(xiàn)象，往往是需要更換保護(hù)柱的信號。
b.樣品前處理
1. 樣品中的雜質(zhì)通常會污染色譜柱，建議采用合適的SPE技術(shù)(Oasis或Sep-pak)凈化樣品來避免這個問題。
2.用流動相或比流動相洗脫強(qiáng)度弱的溶液(含有較少有機(jī)溶劑)溶解或稀釋樣品可以獲得最好的峰形和檢測靈敏度。
3.果樣品在流動相中不溶解或者溶解度很差時，要確保樣品、樣品溶液和流動相是互溶的，以避免樣品在流動相中析出。
4. 用0.2μm的濾膜過濾樣品以充分去除顆粒雜質(zhì)，如果樣品溶解在含有機(jī)溶劑的改性劑(如乙腈、甲醇)的溶劑中，在選擇濾膜時要注意膜的材質(zhì)不會在該溶劑中溶解，也可以在8000rpm轉(zhuǎn)速的條件下離心20分鐘后移取上清液進(jìn)樣。
c.pH使用范圍
XTerra™色譜柱的建議pH使用范圍比硅膠基體色譜柱的寬，XTerraMS色譜柱的pH使用范圍是1-12，XTerra RP色譜柱的pH使用范圍是2-11。值得指出的是:色譜柱的壽命取決于所用緩沖液的種類、濃度和溫度。
以下的表格2，3，4列出了建議使用的不同pH的緩沖溶液體系，可以作為開發(fā)LC方法的參考。請注意在高溫條件下使用磷酸鹽緩沖體系會對柱壽命有很大的影響，盡管XTerra色譜柱比硅膠基體色譜柱具有更長的壽命。
表2:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH1-7)
表3:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH 7-12)
表4:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH9-12)
d.溶劑
為了使色譜柱的性能達(dá)到最好，建議使用高品質(zhì)的色譜溶劑。所有水相流動相在使用前都必須經(jīng)過0.2μm濾膜過濾，建議使用Gelman Acrodisc過濾器。含有懸浮顆粒的溶劑通常會堵塞色譜柱入口濾片，這將導(dǎo)致柱壓升高，分離度變差。
溶劑使用前需要充分脫氣，這可以避免在泵和檢測器內(nèi)出現(xiàn)氣泡，同時建議使用在線脫氣裝置，由于在運(yùn)行低壓梯度時水相和有機(jī)溶劑混合會產(chǎn)生氣泡，因此充分脫氣尤為重要。
e.壓力
所有XTerra™色譜柱能夠耐受6000psi(400bar)的壓力，為了獲得更長的使用壽命，我們還是建議色譜柱盡可能在低于4000~5000psi壓力下使用。
f.溫度
XTerra™色譜柱的建議使用溫度是20-60℃，高溫可以提高分離選擇性、降低流動相粘度并同時提高傳質(zhì)速率。然而，超過室溫使用色譜柱對柱壽命有都負(fù)面影響，其影響程度取決于流動相pH和所使用的緩沖體系。
g.等度分離方法的轉(zhuǎn)移
請根據(jù)如下公式計算不同規(guī)格的色譜柱相應(yīng)的體積流速(保持流動相的線速度不變)、上樣量和上樣體積:
如果色譜柱內(nèi)徑和長度改變:
F2=F1×(r2/r1)
上樣量2=上樣量1X(r2/r1)×(L2/L1)
上樣體積2=上樣體積1X(r2/r1)2×(L2/L1)
其中，r代表色譜柱內(nèi)徑
F代表體積流速
L代表柱長
1代表初始色譜柱
2代表目標(biāo)色譜柱
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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