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默克高質(zhì)量培養(yǎng)基如何操作
閱讀:840 發(fā)布時間:2022-7-22高質(zhì)量培養(yǎng)基是通過將培養(yǎng)基的各個成分混合研磨成糊狀,然后通過*的造粒工藝和Z后脫水制成的。顆粒培養(yǎng)基為實驗室安全和產(chǎn)品質(zhì)量帶來許多好處。顆粒培養(yǎng)基優(yōu)點明顯:1、能顯著減少培養(yǎng)基的飛塵,減少有毒成分的吸入,使用更安全。2、可減少操作者的過敏反應(yīng)。3、可減少粉塵對實驗室儀器、設(shè)備和衣服的污染。4、更容易稱量。5、溶解速度快,不結(jié)塊。6、可以延長保質(zhì)期。7、安全,減少有毒有害成分的吸入和污染。8、防止組件分離和結(jié)塊。9、成分分布均勻穩(wěn)定,重現(xiàn)性好。10、稱量方便,流動性好,防止粘壁。11、快速均勻地溶解在水中。
高質(zhì)量培養(yǎng)基實驗操作步驟:
1、基質(zhì)膠包被的培養(yǎng)板:取出6孔板/12孔板,并加入1mL/0.5mL即用型基質(zhì)膠(AC-1001007)移至每個孔,輕輕搖動6孔板/12孔板,使Matrigel*覆蓋培養(yǎng)皿的底部。將其置于37℃的恒溫箱中,保溫1h?2h。實驗前將其取出,并放在干凈的工作臺/生物安全柜中以在室溫下平衡。20分鐘如果暫時不使用,可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周內(nèi)使用。
注意:①冷凍的干細胞數(shù)量約為1×106細胞/mL,相當于6孔板中的1個孔;②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感,因此請在使用后立即拿走,并在使用后立即放回原處。儲存在4°C的冰箱中,不要接觸Matrigel液面的瓶體直接接觸,將影響基質(zhì)膠的質(zhì)量。
2、首先將2?3mL干細胞培養(yǎng)基添加到15mL離心管中,以備后用。
3、解凍:將從液氮中取出的冷凍保存管快速浸入37℃的溫水中,并迅速搖動使其在1?2min內(nèi)解凍;注意:應(yīng)迅速從液氮中取出電池,以盡量減少其暴露于室溫的時間。
4、離心:將凍存管中的凍存溶液解凍后,滴加到裝有干細胞培養(yǎng)基的15mL離心管中。將15mL離心管放入低速離心機中,然后以1200rpm離心。3分鐘;
5、重懸:離心后,棄去上清液,加入1mL人多能干細胞培養(yǎng)基移液,吸干細胞沉淀約3至5次。
6、接種:均勻吹吸后,丟棄已平衡的即用型基質(zhì)膠,將均勻吹干的干細胞懸液加入包被的6孔板中,并在每個孔中填充2mL訓(xùn)練系統(tǒng)。
7、高質(zhì)量培養(yǎng)基培養(yǎng):可將接種的6孔板置于倒置相差顯微鏡下,觀察接種的干細胞的密度和細胞團的大小。超過4個細胞的團塊更合格。水平的十字架很輕。搖動6孔板/12孔板以均勻分布細胞。在37°C和5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育。第二天觀察細胞的粘附;
8、更換培養(yǎng)基:從復(fù)蘇開始每隔24小時更換一次培養(yǎng)基。
高質(zhì)量培養(yǎng)基是用于人類多能干細胞的培養(yǎng)基,它沒有外來動物成分,化學(xué)成分清晰,并且適合無滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)。該產(chǎn)品適用于系統(tǒng)中培養(yǎng)的干細胞,可用于干細胞傳代。它含有防止細胞凋亡和分化的干細胞保護因子,并對細胞具有良好的保護作用。
1、不需要滋養(yǎng)細胞。
2、成分清晰,批次之間的差異很小。
3、適用于在Essential8系統(tǒng)中培養(yǎng)的人多能干細胞。
4、不含外來動物成分,大大降低了各種病毒,霉菌和支原體污染的風(fēng)險。