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斜面培養(yǎng)基的制作方法
閱讀:3032 發(fā)布時(shí)間:2022-11-17 有一種簡捷快速制備斜面培養(yǎng)基的方法,現(xiàn)介紹如下:
制作培養(yǎng)基斜面,傳統(tǒng)的方法是將試管每10支為一組扎成一捆,高壓滅菌后,一支一支地?cái)[成斜面,操作比較煩瑣,占用面積又多,造成諸多不便。
1、將膠合板截成長18厘米(與試管長度相等或略短)、寬9厘米(比并排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用。
2、在并排5支試管上面平置截好的膠合板,再在膠合板上面并排放5支試管,然后將試管的上、下端分別用牛皮紙包好,用線扎緊,使膠合板兩側(cè)的試管保持平行,置高壓鍋中滅菌。
3、高壓滅菌后,經(jīng)自然冷卻,待氣壓降至零時(shí),將高壓鍋的鍋蓋打開點(diǎn),當(dāng)棉塞水分充分蒸發(fā)后取出,不用拆捆,直接擺成斜面。大量制斜面時(shí),既快捷又很少占用空間,非常方便,還便于保溫,減緩凝結(jié)速度,充分吸收游離水分。
4、如需將斜面培養(yǎng)基保存一段時(shí)間,可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外并扎緊袋口,滅菌后取出,直接擺成斜面,可防止水分蒸發(fā)。
1、配制溶液
向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,按照培養(yǎng)基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最后補(bǔ)足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質(zhì),需加熱溶解,加熱過程所蒸發(fā)的水分,應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。
配制固體培養(yǎng)基時(shí),先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續(xù)加熱至完/全融化。并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。
2、調(diào)節(jié)pH值
用pH試紙(或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì))測試培養(yǎng)基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。
3、過濾
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時(shí),最好折疊成六層,用濾紙過濾時(shí),可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。
4、分裝
已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基,須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基,則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。
分裝時(shí),一手捏松彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí),注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
裝入試管的培養(yǎng)基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí),每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),如制作深層培養(yǎng)基,每只20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,一般以其容積的一半為宜。
5、加棉塞
分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時(shí),要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時(shí)左手食指與拇指稍稍緊握,就會(huì)形成1個(gè)長棒形的棉塞。棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi),上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,準(zhǔn)備滅菌。
6、制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基
培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。
(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺上放1支長0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。
(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基末長雜菌,即可用來培養(yǎng)微生物。