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關(guān)鍵詞:細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介:世界*品牌細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
概念:
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率,表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞??寺⌒纬陕史从臣?xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
1.試劑與材料
(1)供融合用的脾細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞。
(2)1640培養(yǎng)液100ml。
(3)*1640液100ml。
(4)2.5%FCS-1640液50ml。
(5)HAT培養(yǎng)液100ml。
(6)50%PEG:取分子量4000,高純度的(日本進(jìn)口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌,使用前用預(yù)熱于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚紅檢查pH,一般不必調(diào)pH。如pH有改變,可用HCl或NaHCO3調(diào)整。
(7)10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。
(8)40孔塑料培養(yǎng)盤(pán)。
2.操作方法
⑴準(zhǔn)備好脾細(xì)胞。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾細(xì)胞和107小鼠骨髓瘤細(xì)胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。
⑶室溫400g離心3min,使細(xì)胞沉淀。
⑷移去上清液。
⑸輕敲管底部,使沉淀流動(dòng),把沉淀管放于40℃水浴中,使其達(dá)融合溫度。
⑹加預(yù)熱至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見(jiàn)有顆粒出現(xiàn),滴加過(guò)程要求持續(xù)2min。
⑺加1ml1640液,邊加邊搖動(dòng),持續(xù)1min。
⑻重復(fù)⑺一次。
⑼加1ml1640液,邊加邊搖動(dòng),持續(xù)0.5min。
⑽重復(fù)⑼一次。
⑾加1640液15ml。
⑿室溫,400g離心1min,使細(xì)胞沉淀。
⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。
⒁往已于前一日種有飼養(yǎng)細(xì)胞的40孔塑料培養(yǎng)盤(pán)中滴加融合的細(xì)胞液,每孔1滴(約0.05ml)。
⒂輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。
⒃第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養(yǎng)液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細(xì)胞吸出,根據(jù)需要加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞。
⒄于第12、15日加入含有HAT的*1640培養(yǎng)液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)出來(lái)。大多數(shù)雜交瘤細(xì)胞在10~20天內(nèi)出現(xiàn),但也有在1個(gè)月左右才能出現(xiàn)的。雜交瘤細(xì)胞出現(xiàn)后,吸取上清液,檢查抗體。
⒅對(duì)繼續(xù)生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖傳代。在傳代過(guò)程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時(shí)保存于液氮和進(jìn)行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產(chǎn)生抗體細(xì)胞的變異和丟失。
主要特性:
①蛋白質(zhì)的精細(xì)結(jié)構(gòu);
②淋巴細(xì)胞亞群的表面新抗原;
③組織相容性抗原;
④激素和藥物的放射免疫(或酶免疫)分析;
⑤腫瘤的定位和分類(lèi);
⑥純化微生物和寄生蟲(chóng)抗原;
⑦免疫治療和與藥物結(jié)合的免疫-化學(xué)療法 。
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