關鍵詞:Western Blotting服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌Western Blotting服務|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
Western Blotting服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
免疫蛋白質印跡(Western blotting)是根據(jù)抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。寶賽生物為您提供全套的常規(guī)免疫印記技術服務，同時本公司采用**的LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)和雙色熒光染料標記的二抗推出高靈敏度的紅外激光免疫印跡服務。與常規(guī)化學發(fā)光方法比較，靈敏度可達到皮克級（pg），還具有雙色成像、定量、成像清晰的優(yōu)點。同時具備功能強大的軟件系統(tǒng)，可快速判定樣品分子量大小并進行定量分析。
1.樣品收集
1）培養(yǎng)的細胞
貼壁和懸浮細胞收集方式不同，細胞裂解液種類各異，推薦含SDS的凝膠加樣緩沖液裂解，煮沸即可。
2）動物組織
與細胞不同，組織塊由于體積較大，須預先經(jīng)破碎勻漿處理。
2．樣品定量
樣品電泳前需測定蛋白濃度，以便保證上樣量一致，有利于后續(xù)定量或半定量分析。常用的蛋白質濃度測定方法有好多種，其靈敏度和所需時間不同，且不同的方法會受不同干擾物質的影響，實驗者可根據(jù)樣品制備方法（裂解液成分、去垢劑和還原劑種類等）自行選擇。
注意事項：
a. 應盡量避免引入影響后續(xù)定量的雜蛋白（如細胞培養(yǎng)液、蛋白酶抑制劑等）及其他干擾物質；
b. 樣品濃度應適中，1×SDS凝膠加樣緩沖液建議用量：貼壁細胞按10cm2培養(yǎng)皿/0.1ml，懸浮細胞按5×106細胞/0.1ml比例加入；
c. SDS對蛋白質變性和電泳分離至關重要，濃度應控制在2-10%之間，并根據(jù)具體需要調整；
d. 制備好的樣品可以在-20℃保存，但時間不宜過長，并避免反復凍融，否則蛋白會發(fā)生降解；
e. 內參對實驗結果至關重要，應選擇合適的內參。
Western印跡含一系列步驟，包括：
?? 用聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白樣品。
?? 將膠上的蛋白轉移到膜上。
?? 鑒定膜上特定蛋白。
主要實驗步驟如下：
1. 蛋白質抽提
2. 蛋白質定量
3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)
4. 蛋白質轉移到硝酸纖維膜；
5. 膜的封閉和一抗抗體孵育；
6. Rockland熒光標記二抗孵育
7. LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃描
8. Odyssey軟件數(shù)據(jù)分析
9. 提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關圖表