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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500ml |
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貨號(hào) | T1320 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 液體,2.5g 豬胰蛋白酶和0.2g EDTA溶于1升PBS。不含鈣和鎂,含酚紅 |
T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液
在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA,其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解,使組織或細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是由動(dòng)物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細(xì)胞骨架,打開細(xì)胞-細(xì)胞,細(xì)胞-基質(zhì)之間的連接從而使細(xì)胞從培養(yǎng)板上脫落下來并使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞。胰蛋白酶液濃度越高,作用越強(qiáng),但超過一定限度會(huì)損傷細(xì)胞。細(xì)胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25%,pH為7.2-7.4之間,用濾器過濾除菌。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和,使用后培養(yǎng)瓶要*清洗,否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時(shí)間:2-10分鐘。用含血清培養(yǎng)液終止其對細(xì)胞的消化作用。
使用說明:1、貼壁細(xì)胞的消化:貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長成致密單層后,繼續(xù)生長的空間不足,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,同時(shí)代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養(yǎng),擴(kuò)增、傳代。對于懸浮生長細(xì)胞和貼壁不太緊的細(xì)胞如SP2/0,293等,可直接吹散后分瓶;而對于貼壁較緊的細(xì)胞如Hela,HepG2,CHO等,則需要以細(xì)胞消化液消化后,才能脫落和分散,擴(kuò)瓶。一般操作過程為(以下操作均必須嚴(yán)格按無菌操作的要求進(jìn)行):
(1)將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去;
(2)加入0.25%胰酶溶液,視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤;
(3)一般消化時(shí)間約為13分鐘,肉眼觀察瓶底由半透明(細(xì)胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為點(diǎn)狀透明(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時(shí),棄去細(xì)胞消化液,并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,吹打分散;
(4)視實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆秩攵嗥坷^續(xù)培養(yǎng),一般比例為一傳二到一傳四的。
2、組織的消化:不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項(xiàng):1.由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況,確定佳消化時(shí)間;消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長狀況;
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染;
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存,切忌反復(fù)凍融,
4、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套進(jìn)行試驗(yàn)操作。
相關(guān)文獻(xiàn):
《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu,Yubing Liang,Yong Xiao,Jing Lv,Ruicong Guan,Fei Xiao,Yubo Xie,and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因子:3.486 PMID:30858699
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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液
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