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更新時(shí)間:2024-08-23 08:03:43瀏覽次數(shù):4871評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 25管/24樣 |
---|---|---|---|
貨號(hào) | BC0510 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 檢測(cè)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性 |
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒
分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:2200
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
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簡(jiǎn)要介紹:
復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、 微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從 NADH 傳遞給 CoQ,同時(shí)可使O2還原生成 O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。 測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS) 生成狀態(tài)。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體25 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前加入2mL丙tong
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;溶于1mL丙tong,可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。
試劑四:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入2mL蒸餾水,現(xiàn)配現(xiàn)用;
工作液的配制:臨用前將試劑二和試劑三1:1混合,現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明:
復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從NADH傳遞給CoQ,同時(shí)可使O2還原生成O2-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài)。
復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、復(fù)合體的提?。?/span>
二、測(cè)定步驟:
試劑名稱 | 測(cè)定管 |
樣本 | 50 |
試劑一 | 770 |
工作液 | 100 |
試劑四 | 80 |
將上述試劑分別加入比色皿后迅速吹打混勻,記錄第10s的吸光值A(chǔ)1,迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘,之后迅速取出比色皿并擦干,記錄2min時(shí)的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。 |
三、復(fù)合體Ⅰ活力單位的計(jì)算:
單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅰ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL; T:反應(yīng)時(shí)間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
注意事項(xiàng):
A、上清中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體I活性(U/g)= [ΔA1×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣)÷T
=1608×ΔA1÷W。
ΔA1:上清測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V提取:加入提取液體積,1mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;W:樣本重量,g。
B、沉淀中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體I活性(U/g)= [ΔA2×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣本))÷T
=643×ΔA2÷W。
ΔA2:沉淀測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm d:比色皿光徑,1cm;V提?。撼恋碇貞殷w積,0.4mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;W:樣本重量,g。
C、樣本復(fù)合體I總活力的計(jì)算:
樣本復(fù)合體I總活力即為上清中復(fù)合體I活力與沉淀中復(fù)合體I活力之和。
按樣本鮮重計(jì)算:
復(fù)合體I(U/g 鮮重)=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。
相關(guān)文獻(xiàn):
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