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          目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標(biāo)檢測(cè)試劑盒>>生化試劑盒>> BC0510線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒

          線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒
          • 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
          • 型號(hào) BC0510
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地 北京市
          屬性

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          更新時(shí)間:2024-08-23 08:03:43瀏覽次數(shù):4859評(píng)價(jià)

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          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25管/24樣
          貨號(hào) BC0510 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油
          主要用途 檢測(cè)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性
          線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒:復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH 脫氫生成 NAD+,在 340nm下測(cè)定 NADH 的氧化速率計(jì)算出該酶 活性的大小。

                                          線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒
                                                                                                        分光光度法

          產(chǎn)品名稱:  線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒

          產(chǎn)品英文名: Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

          產(chǎn)品貨號(hào):BC0510            產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

          產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣             產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
          保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價(jià)格:2200
          庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
          關(guān)鍵字:       線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ檢測(cè)試劑盒|  線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ|線粒體呼吸鏈|試劑盒

          簡(jiǎn)要介紹:
          復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、 微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從 NADH 傳遞給 CoQ,同時(shí)可使O2還原生成 O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。 測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS) 生成狀態(tài)。

          產(chǎn)品詳細(xì)描述
          產(chǎn)品內(nèi)容:
          提取液:液體25 mL×1瓶,4保存;  
          試劑一:液體25 mL×1瓶,4保存;
          試劑二:粉劑×1支,4保存;臨用前加入2mL丙tong
          試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;溶于1mL丙tong,可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。
          試劑四:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入2mL蒸餾水,現(xiàn)配現(xiàn)用;   
          工作液的配制:臨用前將試劑二和試劑三1:1混合,現(xiàn)配現(xiàn)用。
          產(chǎn)品說(shuō)明
          復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從NADH傳遞給CoQ,同時(shí)可使O2還原生成O2-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài)。
          復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。
          試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
          紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
          操作步驟:
          一、復(fù)合體的提?。?/span> 

          1. 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1.0 mL提取液,用勻漿器或研缽于冰上勻漿。
          2. 4 ℃ 600 g離心10min。
          3. 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
          4. 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅰ(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
          5. 在沉淀中加入400μL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復(fù)15次),用于復(fù)合體Ⅰ酶活性測(cè)定,并且用于蛋白含量測(cè)定。

          二、測(cè)定步驟:

          1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)340nm,蒸餾水調(diào)零。
          2. 試劑一37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)預(yù)熱15min。
          3. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入
          試劑名稱測(cè)定管
          樣本50
          試劑一770
          工作液100
          試劑四80
          將上述試劑分別加入比色皿后迅速吹打混勻,記錄第10s的吸光值A(chǔ)1,迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘,之后迅速取出比色皿并擦干,記錄2min時(shí)的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

          三、復(fù)合體Ⅰ活力單位的計(jì)算:  
          單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
          復(fù)合體Ⅰ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
          V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL; T:反應(yīng)時(shí)間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
          注意事項(xiàng):

          1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于1.5),可用蒸餾水稀釋上清液后再測(cè)定。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4,需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù));若ΔA偏小,則可以通過(guò)增加加入的樣品體積來(lái)提高靈敏度。
          2. 樣品蛋白濃度需自行測(cè)定,推薦我公司BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。由于提取液中含有蛋白,所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。
          3. 推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活,若用樣本鮮重計(jì)算,則需加測(cè)胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
          4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應(yīng)。
          5. 附:使用樣本重量計(jì)算公式:(樣本檢測(cè)數(shù)為25T/12S)

          A、上清中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
          按樣本鮮重計(jì)算:
          單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位
          復(fù)合體I活性(U/g= [ΔA1×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V)÷T
                             =1608×ΔA1÷W。
          ΔA1:上清測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V提取:加入提取液體積,1mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;W:樣本重量,g。
          B、沉淀中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
          按樣本鮮重計(jì)算:
          單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
          復(fù)合體I活性(U/g= [ΔA2×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣本)÷T
                             =643×ΔA2÷W

          ΔA2:沉淀測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm d:比色皿光徑,1cm;V提?。撼恋碇貞殷w積,0.4mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;W:樣本重量,g。
          C、樣本復(fù)合體I總活力的計(jì)算:
          樣本復(fù)合體I總活力即為上清中復(fù)合體I活力與沉淀中復(fù)合體I活力之和。
          按樣本鮮重計(jì)算:
          復(fù)合體IU/g 鮮重)=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。

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