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          目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標檢測試劑盒>>生化試劑盒>> BC0510線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

          線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
          • 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準
          • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
          • 型號 BC0510
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地 北京市
          屬性

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          更新時間:2024-08-23 08:03:43瀏覽次數(shù):4978評價

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          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25管/24樣
          貨號 BC0510 應用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油
          主要用途 檢測線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性
          線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒:復合體Ⅰ能夠催化NADH 脫氫生成 NAD+,在 340nm下測定 NADH 的氧化速率計算出該酶 活性的大小。

                                          線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
                                                                                                        分光光度法

          產(chǎn)品名稱:  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

          產(chǎn)品英文名: Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

          產(chǎn)品貨號:BC0510            產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

          產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣             產(chǎn)品商標:solarbio
          保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價格:2200
          庫存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
          關(guān)鍵字:       線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ檢測試劑盒|  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ|線粒體呼吸鏈|試劑盒

          簡要介紹:
          復合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,廣泛存在于動物、植物、 微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從 NADH 傳遞給 CoQ,同時可使O2還原生成 O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。 測定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS) 生成狀態(tài)。

          產(chǎn)品詳細描述
          產(chǎn)品內(nèi)容:
          提取液:液體25 mL×1瓶,4保存;  
          試劑一:液體25 mL×1瓶,4保存;
          試劑二:粉劑×1支,4保存;臨用前加入2mL丙tong
          試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;溶于1mL丙tong,可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。
          試劑四:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入2mL蒸餾水,現(xiàn)配現(xiàn)用;   
          工作液的配制:臨用前將試劑二和試劑三1:1混合,現(xiàn)配現(xiàn)用。
          產(chǎn)品說明
          復合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ,同時可使O2還原生成O2-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài)。
          復合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+,在340nm下測定NADH的氧化速率計算出該酶活性的大小。
          試驗中所需的儀器和試劑:
          紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
          操作步驟:
          一、復合體的提?。?/span> 

          1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1.0 mL提取液,用勻漿器或研缽于冰上勻漿。
          2. 4 ℃ 600 g離心10min。
          3. 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
          4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
          5. 在沉淀中加入400μL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復15次),用于復合體Ⅰ酶活性測定,并且用于蛋白含量測定。

          二、測定步驟:

          1. 紫外分光光度計預熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長340nm,蒸餾水調(diào)零。
          2. 試劑一37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)預熱15min。
          3. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入
          試劑名稱測定管
          樣本50
          試劑一770
          工作液100
          試劑四80
          將上述試劑分別加入比色皿后迅速吹打混勻,記錄第10s的吸光值A(chǔ)1,迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中準確反應2分鐘,之后迅速取出比色皿并擦干,記錄2min時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。

          三、復合體Ⅰ活力單位的計算:  
          單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
          復合體Ⅰ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
          V 反總:反應體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL; T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
          注意事項:

          1. 為保證實驗結(jié)果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于1.5),可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結(jié)果時注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4,需將樣本稀釋適當倍數(shù)(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù));若ΔA偏小,則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。
          2. 樣品蛋白濃度需自行測定,推薦我公司BCA蛋白濃度測定試劑盒。由于提取液中含有蛋白,所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
          3. 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本鮮重計算,則需加測胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
          4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應。
          5. 附:使用樣本重量計算公式:(樣本檢測數(shù)為25T/12S)

          A、上清中復合體I活力的計算:
          按樣本鮮重計算:
          單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
          復合體I活性(U/g= [ΔA1×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V)÷T
                             =1608×ΔA1÷W。
          ΔA1:上清測定值;V 反總:反應體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應時間,2 min;W:樣本重量,g
          B、沉淀中復合體I活力的計算:
          按樣本鮮重計算:
          單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
          復合體I活性(U/g= [ΔA2×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣本)÷T
                             =643×ΔA2÷W。

          ΔA2:沉淀測定值;V 反總:反應體系總體積,10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm d:比色皿光徑,1cm;V提?。撼恋碇貞殷w積,0.4mL ;V 樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應時間,2 min;W:樣本重量,g。
          C、樣本復合體I總活力的計算:
          樣本復合體I總活力即為上清中復合體I活力與沉淀中復合體I活力之和。
          按樣本鮮重計算:
          復合體IU/g 鮮重)=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。

          相關(guān)文獻:

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          《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
          《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
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          《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影響因子:5.657 PMID:30639616
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          《The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility》 作者:Fengjiao Jin, Zhaozhen Wu, Xiao Hu, et al. 期刊:Cancer Biol Med 影響因子:4.467 PMID:31119045
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