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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
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貨號 | SEKH-0005 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 血清/血漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
人白細(xì)胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI
人白細(xì)胞介素 1 可溶性受體 I 型 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號:SEKH-0005
適用于人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本
背景介紹:
IL-1 家族受體包括 10 個成員,大部分受體胞外區(qū)含有 3 個類似免疫球蛋白 (IgG)的片段。IL -1RI、IL-1RII和 IL-1RIII 是可以與 IL1α及 IL-1β結(jié)合的受體,IL-l 是一種 T 淋巴細(xì)胞激活因子,主要產(chǎn)生于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等,是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的主要致炎性細(xì)胞因子,誘導(dǎo) T 和 B 細(xì)胞分化和增殖,亦誘導(dǎo)抗原特異性殺傷細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的增殖,在慢性炎癥和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。人 IL-l RI 基因編碼 549 個氨基酸,其中胞外區(qū) 316 個氨基酸.單次跨膜區(qū) 20 個氨基酸和胞內(nèi)區(qū) 213 個氨基酸,分子量為 80 kDa,含有 3 個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。IL-1RI,IL-1RII 及參與活性調(diào)節(jié)的 IL-lR 輔助蛋白,三者均為膜受體,共同參與和 IL-1 的結(jié)合及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo),IL-1RAcp 本身不與 IL-1 結(jié)合, 但在 IL-1 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起關(guān)鍵作用。
檢測原理:
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗人 IL-1 RI 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上;分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本,標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人 IL-1 RI 會與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗人 IL-1 RI 抗體,該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人 IL-1 RI 發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強(qiáng)度的非共價結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物 TMB,若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的人 IL-1 RI,則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺(正相關(guān))的藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD),樣本中的人 IL-1 RI 濃度與OD 成正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中人 IL-1 RI 的濃度。
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。. 6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護(hù);在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實驗室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實驗器材(不提供,可代購)
1. 酶標(biāo)儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機(jī)或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管
樣本收集及儲存:
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù)。
人白細(xì)胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI
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