方法一：依據(jù)GBT21317-2007
1. 前處理（以牛肉為例）
取已經(jīng)勻漿好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml 離心管中，加入50ul，10ppm 的混標(biāo)，
保證每kg 肉中含1mg 標(biāo)樣。
分別加入20ml、20ml、10ml 0.1mol/L EDTA-Mallvaine 緩沖液冰水浴中超聲10min 后取出，
3000r/min 下離心5min，合并上清液，定容至50ml，離心，取上清液，混勻，待凈化。
Mallvaine 緩沖液配制：將500ml 0.1mol/L 檸檬酸溶液與312.5 ml 0.2mol/L 磷酸氫二納溶液
混合，NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH 值至4.0+/- 0.05
0.1mol/L EDTA-Mallvaine 緩沖液配制：稱取30.25g 乙二胺四乙酸二鈉放入812.5 ml Mallvaine
緩沖液中，使其溶解，混勻。
固相萃取小柱：
InertSep Pharma （3ml/60mg 或6ml/500mg）WondaSep HLB 3ml/60mg 均可
SPE 方法：
活化/平衡：5ml 甲醇、5ml 水
上樣：50ml 待測(cè)液中準(zhǔn)確取10ml 過柱
清洗：5ml 水、5ml 甲醇：水=1：19
小柱脫水干燥
洗脫：10ml 甲醇：乙酸乙酯=1：9
將洗脫液氮吹至干，用流動(dòng)相定容至1ml，過濾，待測(cè)。
2. 色譜分析
色譜柱：InertSustain C18 5um 4.6*250mm
流動(dòng)相：乙腈：甲醇：0.01%草酸溶液=2：1：7
流速：1.0ml/min
柱溫：25℃
進(jìn)樣量：60 ul
檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm
儀器：Shimadzu LC-20A

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
基質(zhì)加標(biāo)濃度為 1mg/kg，3 次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
名稱          空白加標(biāo)             基質(zhì)加標(biāo)
       回收率    回收率RSD     回收率   回收率RSD
土霉素 98.63%     7.5%         85.19%    2.2%
四環(huán)素 100.96%    8.4%         95.73%    5.8%
金霉素 91.05%     6.6%         98.11%    8.1%

......(具體情況基色普?qǐng)D參照附件)