Ludger 聚糖釋放試劑盒(Glycan Release Kits)的應(yīng)用：

For release of glycans from glycoprotein therapeutics

糖蛋白中釋放聚糖

聚糖釋放試劑盒（Ludger Glycan Release Kits）有三種：

一、N-和O-聚糖釋放試劑盒

LudgerLiberateTM Hydrazinolysis Glycan Release Kit for N- and O-Glycan Release

(Cat# LL-HYDRAZ-A2)

For release of N + O-linked glycans from glycoprotein therapeutics.

1. 應(yīng)用：糖蛋白釋放N-和O-聚糖

2. 檢測樣本數(shù)量：12個糖蛋白樣本

3. 樣本量：1mg以上

4. 樣本：Biopharmaceutical glycoproteins 糖蛋白

5. 運輸及保存：常溫運輸，4度保存，避光，可保存18個月

6. 試劑盒成分：

N-和O-聚糖釋放試劑盒使用操作步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備：準(zhǔn)備糖蛋白或糖肽樣本，需先去除干擾多肽釋放的污染物，如鹽、洗滌劑、染料等，獲得比較純的糖蛋白

2. 干燥樣本：將樣本放置在反應(yīng)管中，冷凍干燥或離心蒸發(fā)至*干燥

3. 加肼試劑：將肼試劑加入反應(yīng)管中，蓋上蓋漩渦混勻

4. 孵育：孵育樣本，讓聚糖釋放。

  O-Mode Hydrazinolysis： Incubate 6 hours at 60℃

  N-Mode Hydrazinolysis (Fast)： Incubate 5 hours at 100℃

  N-Mode Hydrazinolysis (Normal)： Incubate 16 hours at 85℃

  N+O Mode Hydrazinolysis ： Incubate 16 hours at 60℃

5. 冷卻樣本至室溫

6. 離心蒸發(fā)去除多余的酰肼

7. 乙酰化作用：加醋酸酐乙?；坞x的氨基，得到β-乙酸肼（根據(jù)糖苷類型N-Glycans，O-Glycans或N+O-Glycans，操作方式有差別，詳見說明）

8. 酸化和純化游離的聚糖根據(jù)糖苷類型N-Glycans，O-Glycans或N+O-Glycans，操作方式有差別，詳見說明）：

1）N-聚糖：用EB20聚糖純化柱(Cat # LC-EB20-01)

2）O-聚糖或N+O-聚糖：用CEX聚糖純化柱(Cat# LC- CEX-H-01)

9. 保存或分析釋放的聚糖：可直接分析或熒光標(biāo)記分析

二、N-聚糖釋放試劑盒

Ludger Liberate MR(Membrane Release) Glycan Release Kit（Cas# LL-MR-A2）

For immobilizing, clean up and PNGaseF mediated release of glycans from glycoproteins

應(yīng)用：固定、清除和PNGaseF（肽 N-糖苷酶F）介導(dǎo)釋放糖蛋白中的N-聚糖。固定糖蛋白可以去除干擾聚糖分析的低分子量溶劑/緩沖組分，例如海藻糖。

PNGase F幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-連聚糖（x=H或寡糖）

肽 N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一種酰氨酶，可以在 N- 連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復(fù)合寡糖部分zui內(nèi)側(cè)的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間進行切割

樣品數(shù)：96孔板，適用于檢測96個樣本

樣本及樣品量：樣本為糖蛋白，每孔>100ug糖蛋白，具體根據(jù)樣本來定

儲存及運輸：試劑盒中成分依據(jù)說明書儲存，常溫運輸

三、O-聚糖快速釋放試劑盒

Ludger Liberate Orela O-Glycan Release Kit （Cas# LL-ORELA-A2）

For release of O-linked glycans from glycoprotein therapeutics.

應(yīng)用：用于釋放糖蛋白中的O-聚糖，釋放的聚糖有游離的末端，通過還原胺化反應(yīng)可以做熒光標(biāo)記進行檢測。

樣品數(shù)：可檢測12個糖蛋白樣本

樣品及樣本量：Biopharmaceutical glycoproteins 生物制藥糖蛋白，每個樣本的量>1mg

儲存及運輸：試劑盒中成分依據(jù)說明書儲存，常溫運輸

聚糖釋放試劑盒（Ludger Glycan Release Kits）,Ludger糖基化分析和檢測步驟圖如下，可根據(jù)下圖來選擇Ludger產(chǎn)品：