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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
脫氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen 法、甲基綠-派洛寧法、吖啶橙熒光法等,其中經(jīng)典的是Feulgen 法, 該法是一種經(jīng)典的酶組織化學(xué)法。
Feulgen Stain 原理在于DNA 經(jīng)溫和的弱酸(例如鹽酸)水解后,嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開,并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與Schiff 試劑結(jié)合,形成紫紅色化合物,使細(xì)胞內(nèi)含有DNA 的部位呈紫紅色,紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基(醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán), 所以凡含有DNA 的部位就呈紫紅色,該水解作用不影響核糖-嘌呤結(jié)合鍵,因此RNA 用此法處理后則分解,所以該法不適用于證明RNA。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途
產(chǎn)品組成:
名稱 |
3×50ml |
Storage | |
試劑(A): Schiff Reagent | 50ml | 4℃ 避 光 | |
試劑(B): SO2 水 | B1: 弱酸溶液 | 50ml | RT |
B2: 亞硫酸鹽溶液 | 50ml | RT | |
使用說明書 | 1 份 |
自備材料:
1、蒸餾水、系列乙醇
2、恒溫箱
操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1、 組織固定:Carnoy 固定石蠟切片較好,10%福爾馬林亦可,不宜采用 Bouin 固定液。
2、 配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸餾水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸餾水, 充分混合,即獲得弱酸工作液。
3、 石蠟切片二甲苯或 脫蠟透明液脫蠟至蒸餾水。
4、 入弱酸工作液室溫浸洗一下。
5、 切片入預(yù)熱至 60℃的弱酸工作液,孵育 8min。
6、 切片入室溫的弱酸工作液中沖洗 1min,蒸餾水沖洗。7、 切片入 Schiff Reagent,室溫避光染色 30~60min。
8、 在上述染色過程中,配制 SO2 水工作液。按弱酸溶液:亞硫酸鹽溶液:蒸餾水=1:5:
94 配制,即取弱酸溶液 1 份、亞硫酸鹽溶液 5 份、蒸餾水 94 份,充分混合,即配即用。
9、 用新鮮配制的 SO2 水工作液洗切片 3 次,每次 90s。
10、 蒸餾水中洗凈,經(jīng)系列乙醇脫水,二甲苯或 脫蠟透明液透明并封片。(二)冰凍切片染色
1、 冰凍切片預(yù)處理:取 1 份乙酸、3 份無水乙醇混合即為固定液,固定 10min。
2、 由無水乙醇脫水—逐級(jí)下行—蒸餾水。
3、 配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸餾水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸餾水, 充分混合,即獲得弱酸工作液。
4、 余下步驟同上述石蠟切片染色。
陰性對(duì)照:將同樣切片經(jīng)上述步驟, 只有步驟 5 改為入室溫弱酸工作液,孵育 15min。結(jié)果為細(xì)胞核 DNA 陰性。
1、 水解時(shí)間很重要,并且應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間。不同的固定液水解時(shí)間不一樣。
固定液 | 水解時(shí)間(min) |
Carnoy 固定液 | 8min |
Helly 固定液 | 8min |
Susa 固定液 | 18min |
福爾馬林 | 8min |
Zenker 液 | 5min |
2、 注意 Schiff Reagent 的純凈程度,若變淺粉紅亦可考慮使用,顏色變紅則棄用。3、 去除切片上多余 Schiff Reagent 的方法以 SO2 水洗為好。
4、 應(yīng)做陰性對(duì)照試驗(yàn)。
有效期:6 個(gè)月有效。
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