抗壞血酸（Vc）測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)

一、試劑盒組成及配置（50T/48樣)

   試劑一；貯備液5mlx1瓶，4℃保存6個(gè)月。

         試劑一應(yīng)用液配制：用時(shí)按照試劑一貯備液：雙蒸水=1:14稀釋，混

         勻制備。 

   試劑二：粉劑x1支，4℃保存6個(gè)月。

         試劑二應(yīng)用液配制：用時(shí)一支粉劑加0.36ml冰醋酸再加水至40ml，

         溶解，4℃保存。

   試劑三：白色結(jié)晶體粉劑x1支，4℃保存6個(gè)月。

         試劑三應(yīng)用液配制：因膠南溶解，用前2-4小時(shí)加95%乙醇或無(wú)水乙

         醇60ml充分溶解，制備，4℃保存。

   試劑四：黃色貯備液0.2mlx1瓶，冰箱4-8℃避光保存，貯存時(shí)間6個(gè)月。

         試劑四應(yīng)用液配制:用時(shí)取0.15ml試劑貯備液加水至25ml制備。（先

         用現(xiàn)配）

   試劑五：液體6mlx1瓶，4℃保存6個(gè)月。

   試劑六：Vc標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑6mgx3支，每瓶?jī)?nèi)含維生素C，4℃保存6個(gè)月。

        60ug/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：將1支標(biāo)準(zhǔn)品粉劑溶于10ml試劑一

        應(yīng)用液中，制備。

        6ug/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用的配制：取60ug/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液再用試劑

        一應(yīng)用液10倍稀釋備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

注：維生素C標(biāo)準(zhǔn)品易氧化，因此，在樣本上清液制備好后在配標(biāo)準(zhǔn)，并在10分鐘內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

二、操作過(guò)程：

   1、上清液制備：取樣本0.15ml加1號(hào)試劑0.45ml，旋渦混勻，放置15分

      鐘后離心，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，上層清亮液體為上清液。

   2、  上清液中Vc的測(cè)定：

混勻放置10分鐘，1cm或者0.5cm光徑，雙蒸水凋零，536nm處測(cè)各管的OD值。

三、計(jì)算公式：

1、血清（漿）的計(jì)算與舉例：

①、計(jì)算公式：

②、計(jì)算舉例：

例1：    取許晴0.15ml，按操作表操作，測(cè)得空白管OD為0.031，標(biāo)準(zhǔn)管OD為0.184，測(cè)定管為OD為0.144，則計(jì)算結(jié)果為：

2：組織的計(jì)算與舉例：

①、計(jì)算公式：

②、計(jì)算舉例：

例1:    取 10%大鼠肝勻漿0.15ml，按操作表操作，測(cè)得空白管OD為0.032，標(biāo)準(zhǔn)管OD為0.184，測(cè)定管為OD為0.146，同時(shí)測(cè)得10%大鼠肝勻漿蛋白濃度為8.5mgprot/ml。

則計(jì)算結(jié)果為：

例2：   取20%輪蟲(chóng)勻漿0.15ml，按操作表操作，測(cè)得空白管OD為0.031，標(biāo)準(zhǔn)管為OD為0.186，測(cè)定管為0.177，同時(shí)測(cè)得20%輪蟲(chóng)勻漿蛋白濃度為0.8537mgprot/ml。則計(jì)算結(jié)果為：

四、測(cè)定原理：

    本法對(duì)Fe與還原性抗壞血酸迅速作用生成Fe，后者在于菲羅啉顯色反應(yīng)，可以測(cè)定血漿中維生素C的含量。

五、測(cè)定的意義：

維生素C在體內(nèi)參與膠原物質(zhì)合成，是脯氨酸羥化酶和賴氨酸羥化酶的輔因子，是催化多巴胺轉(zhuǎn)變成去甲腎上腺的銅酶多巴β羥化酶所必需，當(dāng)維生素C缺乏時(shí)，合成的膠原得不到充分的強(qiáng)化，不能很好的形成纖維

維生素Czui明顯的化學(xué)活性是作為還原劑，他可以將Fe還原成Fe，促使鐵在腸道吸收，促進(jìn)鐵的貯存和利用。

抗壞血酸作為自由基清除劑，可以很快地與O,反應(yīng)，更快地與反應(yīng)生成抗壞血酸自由基，它也可以清楚O，因此，抗壞血酸可以保護(hù)機(jī)體免受內(nèi)源性氧自由基的損傷。

維生素C能與α-生育酚自由基花怒按成維生素E，間接的騎著鏈阻斷劑作用。

維生素C是血漿中有效的抗氧化劑，是細(xì)胞外液抗氧化防御系統(tǒng)的*道防線，Vc對(duì)血漿中正在進(jìn)行著脂質(zhì)過(guò)氧化作用也有阻斷作用。