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          果實中有機酸的測定-HPLC法

          時間:2015-6-16閱讀:2617
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          果實中有機酸的測定-HPLC法


              果實中的有機酸有草酸、乙酸、蘋果酸檸檬酸、琥珀酸乳酸等。乳癰常規(guī)的酸堿滴定法,雖然可測出總算量,但對各成分酸的含量則無法確定,若采用液相色譜法(HPLC)則可解決此難題。

               液相蘇測有機酸是利用有機酸在化學合C18固定相與2%NH4H2PO4的流動相分配系數之間的差異而進行分離后,再經紫外檢測器或示差吸光檢測器而檢出,定性可根據色譜曲線的保留時間,定量可根據色譜峰面積或峰高,利用外標法計算而得。

          試劑和儀器 夜宵液相色譜儀,告訴離心機,0.45nm唯恐過濾膜,10ml進樣器。NH4H2PO4496%乙醇,0.01mol/NaOH及200ppm標準有機酸.

          試驗步驟

          1、樣品的處理 5-10g樣品用80%乙醇25ml于75℃水浴中提取15min,冷后離心,收集煽情也,沉淀10ml80%乙醇洗兩次,江上清液收集在一起,zui后用80%乙醇定容至50ml取5ml蒸發(fā)至干(在75℃下),殘渣用5ml流動相溶解。共色譜測定用。

          2、標準溶液的配制  取200ppm的原液0.5、1、2、3、4ml,用流動相稀釋至5ml混勻后共色譜測定用。

          3、色譜測定

          固定相:化學鍵合C18

          流動相:2.5%NH4H2PO6(PH=2.8)

          流速:1ml/min

          進樣量10ul

          檢測器:紫外檢測器(214nm),0.1AUFS

          以峰高或峰面積做標準曲線,從標準曲線上查找出有機酸濃度求算出有機酸含量。

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