層析技術(shù)

    層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是固定相；另一是流動(dòng)相。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒（流動(dòng)相）通過固定相時(shí)，由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對(duì)比）不同，而且隨溶媒向前移動(dòng)，各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組分，隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)受到的阻滯作用小，向前移動(dòng)的速度快。反之，與固定想相互作用越強(qiáng)的組分，向前移動(dòng)的速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達(dá)到將各組分分離的目的。

層析系統(tǒng)的必要組分有：

（1）、固定相。固定相是層析的一個(gè)基質(zhì)。它可以是固體物質(zhì)（如吸附劑、凝膠，離子交換劑等），也可以是液體物質(zhì)（如固定在硅膠或纖維素上的溶液），這些基質(zhì)能與待分離的化合物進(jìn)行可逆的吸附、溶解，交換等作用。它對(duì)層析的效果起著關(guān)鍵的作用?？梢允且环N固體、凝膠或固定化的液體，由某種支持基質(zhì)所支撐。

（2）、層析床。把固定相填入一個(gè)玻璃或金屬柱中，或者薄薄涂布一層于玻璃或塑料片上或者吸附在醋酸纖維紙上。

（3）、流動(dòng)相。在層析過程中，推動(dòng)固定相上待分離的物質(zhì)朝著一個(gè)方向移動(dòng)的液體、氣體或超臨界體等，都稱為流動(dòng)相。柱層析中一般稱為洗脫劑，薄層層析時(shí)稱為展層劑。它也是層析分離中的重要影響因素之一。

（4）、運(yùn)送系統(tǒng)。用來促使流動(dòng)相通過層析床。

（5）、檢測(cè)系統(tǒng)。用于檢測(cè)試管中的物質(zhì)。

層析根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)可以分為多種類型：

1. 根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類。層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形，在柱中進(jìn)行層析。紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測(cè)分析和少量分離制備，通常為一次性使用，而柱層析是常用的層析形成。適用于樣品分析、分離。生物化學(xué)中常用的凝膠層析、離子交換層析、親和層析、液相色譜等都通常采用柱層析形式。
2. 根據(jù)流動(dòng)相的形式分類。層析可以分為液相層析和氣相層析。氣相層析是指流動(dòng)相為氣體的層析，而液相層析指流動(dòng)相為液體的層析。氣相層析測(cè)定樣品時(shí)需要?dú)饣?，大大限制了其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用，主要用于氨基酸、核酸、糖類、脂肪酸等小分子的分析鑒定；而液相層析是生物領(lǐng)域zui常用的層析形成，適于生物樣品的分析、分離。
3. 根據(jù)分離的原理不同分類。層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。

    吸附層析：是以吸附劑為固定相，根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。

    分配層析：是根據(jù)在一個(gè)有兩相同時(shí)存在的溶劑系統(tǒng)中，不同物質(zhì)的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。

   凝膠過濾層析：是以具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠顆粒作為固定相，根據(jù)物質(zhì)的分子大小進(jìn)行分離的一種。

   離子交換層析：是以離子交換劑為固定相，根據(jù)物質(zhì)的帶電性質(zhì)不同而進(jìn)行分離的一種。

   親和層析：是根據(jù)生物大分子和配體之間的特異性親和力（如酶和仰制劑、抗體和抗原、激素和受體等），將某種配體鏈接在載體上作為固定相，而對(duì)能與配體特異性結(jié)合的生物大分子進(jìn)行分離的一種。親和層析是分離生物大分子zui為有效的，具有很高分辨率。