1、李斯特菌檢測板原理及適用范圍

李斯特菌檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，選擇性試劑，冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU )，李斯特菌檢測板適用于檢測或者計(jì)數(shù)食品及環(huán)境樣品中的李斯特菌菌數(shù)。李斯特菌檢測板檢測的李斯特菌包括單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes)，英諾克李斯特菌(Listeria.innocua)，威氏李斯特菌(Listeria.welshi)，但不能區(qū)分各種菌。

2、李斯特菌檢測板操作方法

2.1 食品樣品檢測

2.1.1  食品樣品處理：取樣品25 g(mL)放入裝有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要，可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進(jìn)行接種。

2.2 環(huán)境樣品檢測

2.2.1  環(huán)境樣品采集：用無菌的涂抹棒或其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣品。濕潤采樣設(shè)備液體體積≤10mL。濕潤劑可以為無菌水，滅菌生理鹽水（磷酸鹽緩沖液）或者緩沖蛋白胨水。

2.2.2  環(huán)境樣品處理：在收集的環(huán)境樣品中添加10mL 滅菌生理鹽水（或磷酸鹽緩沖液），充分混勻。根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要，可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進(jìn)行接種。

2.3 接種：將李斯特菌檢測板上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測板，靜置10s左右，待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)檢測板作為重復(fù)。

2.4 培養(yǎng)：將檢測板疊在一起，倒置于36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)18～24h

3、結(jié)果判讀

在檢測板上生長的藍(lán)綠色點(diǎn)即為李斯特菌陽性點(diǎn)，若檢測板上無菌生長或者長出點(diǎn)為其他顏色點(diǎn)即為李斯特菌陰性。

4  計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式

4.1  樣品計(jì)數(shù)

4.1.1 以生長有30～300CFU的檢測板為計(jì)數(shù)適宜范圍。

4.1.2 若只有一個(gè)稀釋度檢測板上的菌落數(shù)在計(jì)數(shù)合適范圍30～300CFU之間，則計(jì)算兩個(gè)檢測板菌落數(shù)的平均值，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，作為每克（毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.1.3 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式（1）計(jì)算：

                    ∑C

              N= ————————       •••••••••••••••••••（1）

                  （n1+0.1n2）d

  式中：

  N——樣品中李斯特菌菌落數(shù)；

  ∑C——兩個(gè)連續(xù)稀釋度檢測板（含適宜范圍菌落數(shù)的檢測板）李斯特菌落數(shù)之和；

  n1——適宜范圍菌落數(shù)的*個(gè)稀釋度（低）檢測板個(gè)數(shù)；

  n2——適宜范圍菌落數(shù)的第二個(gè)稀釋度（高）檢測板個(gè)數(shù)；

  d——*稀釋度的稀釋倍數(shù)

示例：

結(jié)果表述為2.5×103CFU/g(mL)。

4.1.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長，則以小于1/d（d—zui低稀釋倍數(shù)）計(jì)算。

4.1.5 低數(shù)值的估算：如果實(shí)驗(yàn)樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋懸液（其他樣品）的兩個(gè)檢測板上的菌落數(shù)均小于30CFU，計(jì)算兩個(gè)檢測板上的菌落數(shù)的平均數(shù)。計(jì)算式（2）：

                   ∑C

                 NE = ——    •••••••••••••••••••（2）

                       nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值；

∑C——兩個(gè)檢測板上菌落數(shù)的和；

n——檢測板的數(shù)量；

d——樣品初始懸液或?qū)嶋H接種懸液的稀釋倍數(shù)。

4.1.6 大數(shù)值的估算：若所有稀釋度的檢測板上菌落數(shù)均大于300CFU，計(jì)數(shù)zui接近300CFU的檢測板上的菌落并計(jì)算出平均數(shù)，其他檢測板可記錄為多不可計(jì)。結(jié)果計(jì)算式（3）：

                    ∑C

               NE = —— •••••••••••••••••••（3）

                     nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值；

∑C——兩個(gè)檢測板上菌落數(shù)之和；

n——檢測板的數(shù)量；

d——與樣品懸液相*的稀釋倍數(shù)。

5、結(jié)果報(bào)告

固體樣品以CFU/g為單位報(bào)告，液體樣品以CFU/mL為單位報(bào)告。

6、附加說明

注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。