非洲豬瘟病毒LAMP試劑盒 

African Swine Fever Virus(ASFV)

產(chǎn)品及特點

非洲豬瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死 率幾乎高達(dá) 100%，ASF 近在我國爆發(fā)，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成重大損失，因此 ASFV 的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了 簡單快捷的 ASFV 可視化 LAMP 檢測試劑盒，它具有下列特點： 

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

2. 用 LAMP 恒溫擴(kuò)增法擴(kuò)增 ASFV 特異片段，不需要熒光 PCR 等貴重儀器。 同時擴(kuò)增時間只需要 1 小時，尤其適合現(xiàn)場或?qū)嶒灄l件簡陋的單位使用。

3. 檢測靈敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特異性高，由于使用四條針對 ASFV 保守基因的特異引物，比使用 2 條引 物的 PCR 專一性更高。

5. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結(jié)果。

6. 每個反應(yīng)的線性范圍：10E2-10E7 拷貝/μL，低靈敏度：10 拷貝/μL。

7. 本試劑盒足夠做 50 次 20μL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。本產(chǎn)品只能用于科研。 

非洲豬瘟病毒LAMP試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。MRSALAMP 陽性對照單獨放 置，不要污染其他試劑

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化細(xì)菌樣品 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提 取試劑盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout，可去公司搜索。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對 照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。樣品使用量根據(jù)所選擇的試劑 盒決定。如果樣品使用量為 XmL，則在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP 陽性對照的 10000 倍稀釋液作為樣品制備陽性對照，樣品制備陰性對照是 直接用 X mL 水作為陰性對照，然后和 N 個樣品一起進(jìn)行細(xì)菌 DNA 提取 操作，得到 N+2 個 DNA 樣品。

二、LAMP（20μL 體系）

3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有 N+2 個 DNA 純化樣品，則設(shè)置 N+4 個 LAMP 擴(kuò) 增，增加 LAMP 陰性對照和陰性對照各 1 個。在 N+4 個 PCR 管中加入下 列成分：

4. 混勻，此時反應(yīng)液呈現(xiàn)非常淺的藍(lán)色，由于是否有反應(yīng)是跟陰性對照和反 應(yīng)前對比，所以一定要設(shè)置陰性對照，并且反應(yīng)前要手機照相留存以供反 應(yīng)后比對。

5. 置于 25℃5 分鐘（讓 UNG 滅活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃擴(kuò)增 60 分鐘。如果是在 PCR 儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒 有熱蓋，必須在孔中加水以填充孔和管子間的空隙，并且在管中加 50uL 石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率）。

6. 80℃10 分鐘滅活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 將反應(yīng)管放置在白色背景（如白紙）前觀察，觀察反應(yīng)液顏色并用手機照 相留底。

8. 實驗結(jié)果分析。陽性對照將呈現(xiàn)藍(lán)色，無模板的陰性對照將呈現(xiàn)無色或非 常淺的藍(lán)色，樣品管的顏色如果接近陽性對照則說明有擴(kuò)增，如果接近陰 性對照則說明無擴(kuò)增。標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)結(jié)果如下圖（9 號為陰性，10 號為陽 性，此處的 9 號和 10 號跟下步的電泳照片中的 9 號和 10 號是相同 的兩個樣品）：