禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RT-PCR試劑盒

Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病是由網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖癥病毒（Reticuloendotheliosis Virus， REV）引起的一種腫瘤性傳染病，病雞表現(xiàn)為貧血、消瘦，生長緩慢等。病理解剖特點(diǎn) 是肝臟、腸道、心臟和其它器官有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎縮，腺胃炎。本病能侵害機(jī)體 的免疫系統(tǒng)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫機(jī)能下降或繼發(fā)其它疾病。本產(chǎn)品就是專門用于 REV 的 RT-PCR 檢測的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 提供陽性對照，便于在遇到問題時分析原因。

3. 引物根據(jù) REV 病毒保守的 LTR 序列設(shè)計(jì)，不與其他病毒發(fā)生交叉反應(yīng)。

4. 使用兩步式 RT-PCR，先做 RT 再做 PCR，操作更加靈活。

5. 本試劑盒靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

6. 本試劑盒足夠 50 次 20 μL 體系的 RT 反應(yīng)，50 次 40 μL 體系的 PCR 反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只用于科研

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到試劑盒后請將陽性對照放置到專 門區(qū)域，因?yàn)槠浜休^高濃度的擴(kuò)增產(chǎn)物，容易污染其他試劑。  

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 禽傳染支氣管炎病毒 通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E6 拷貝/μL， 10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中， 充分混勻，此為 100 倍稀釋液。）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加 水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用 水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 次 RNA 提取，則按照下表設(shè)置 N+2 個 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）： 

4. 42℃保溫 60 min，70℃保溫 10 min 以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。此為 cDNA 樣品。

三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)

5. 對 N+2 個 cDNA 樣品，則在 N+4 個 PCR 管中加入下列成分（多的一個是 PCR 陰 性對照，一個是 PCR 陰性對照）：

 6. 上機(jī)進(jìn)行 PCR，PCR 反應(yīng)參數(shù)為：

7. 取 10uL PCR 產(chǎn)物直接在 1%瓊脂糖凝膠上電泳，正確的擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為 220 bp。 陽性對照必須出現(xiàn) 220bp 的 PCR 產(chǎn)物，否則 RT-PCR 體系有問題，需要尋找原因。 如果陰性對照出現(xiàn) 220bp 的 PCR 產(chǎn)物，則說明試劑或環(huán)境中有過去 PCR 產(chǎn)物的污 染，需要把樣品制備和 PCR 反應(yīng)后電泳充分隔離進(jìn)行。如果發(fā)生了污染，則需要另 外設(shè)計(jì)引物，本試劑盒提供的引物和陽性對照將不可用。