皰疹病毒LAMP試劑盒

B Virus(BV)B

產(chǎn)品及特點(diǎn)

B 皰疹病毒（B Virus，BV）又稱(chēng)猴皰疹病毒 I 型，其因感染猴類(lèi)而得名， 但是當(dāng)人被感染 BV 的猴咬或抓傷后也可發(fā)生皮膚損害，會(huì)出現(xiàn)淋巴結(jié)炎及流 感樣綜合征，甚而并發(fā)病毒性腦炎。發(fā)病部位主要是皮膚、淋巴，相關(guān)癥狀為 口咽部水皰狀損害、疲勞、肌痛、皰疹，同時(shí)也會(huì)帶來(lái)頭痛的并發(fā)疾病，對(duì)人 體健康具有重要危害，因此 B 皰疹病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有 著重要作用。本公司在自己開(kāi)發(fā)的技術(shù)基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的 B 皰疹病 毒雙染料 LAMP 試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 一般 60 分鐘內(nèi)出結(jié)果（取決于靶分子濃度），比 PCR 快約 1 小時(shí)。

2. 對(duì) 20 μL 的反應(yīng)體系，大樣品加樣量達(dá)到 14 μL。

3. 含可見(jiàn)光和熒光染料，既可以用金屬浴和水浴擴(kuò)增用可見(jiàn)光肉眼判斷結(jié)果， 也可用熒光 PCR 儀進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。

4. 內(nèi)含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。

5. 特異性比 PCR 高，因?yàn)?LAMP 擴(kuò)增使用 4-6 條引物而不是兩條。

6. 假陰性率低。

7. 提供無(wú)傳染性的陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

8. 只可用于科研，只可進(jìn)行定性檢測(cè)，不能用于定量檢測(cè)。

9. 本產(chǎn)品只適用于 LAMP 檢測(cè)，不適用于進(jìn)行 RT-LAMP 檢測(cè)。

10. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20 μL 體系的 LAMP 擴(kuò)增和檢測(cè)反應(yīng)。

皰疹病毒LAMP試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì) 照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照（NC）。樣品使用量根據(jù)所選擇的試劑 盒決定。如果樣品使用量為 XmL，則在 XmL 水中加 10 μL 試劑盒提供的 陽(yáng)性對(duì)照（1 萬(wàn)拷貝），樣品制備陰性對(duì)照是直接用 X mL 水作為陰性對(duì)照， 然后和 N 個(gè)樣品一起進(jìn)行 DNA 提取操作，得到 N+2 個(gè) DNA 樣品。

二、雙染料 LAMP 擴(kuò)增及檢測(cè)（20μL 體系）

3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有 N+2 個(gè) DNA 純化樣品，則設(shè)置 N+4 個(gè) LAMP 擴(kuò) 增，增加 LAMP陰性對(duì)照和 LAMP 陽(yáng)性對(duì)照各1個(gè)。在 N+4個(gè) 0.2mL PCR 管中加入下列成分：

4. 置混勻后進(jìn)行擴(kuò)增。由于本產(chǎn)品含雙染料，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件選擇下列 兩種方式進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。

5. 如果使用金屬浴或水浴，則必須先在每個(gè)反應(yīng)管中加 30 μL 石蠟油，否則 保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率。65℃保溫 120 分鐘。

6. 如果使用熒光定量 PCR 儀：設(shè)聚合溫度 65℃，1 次循環(huán) 1 分鐘，120 個(gè) 循環(huán)，每分鐘在 FAM 通道采集一次熒光信號(hào)。

三、結(jié)果分析及解讀

7. 如果是用水浴或金屬浴進(jìn)行的擴(kuò)增，反應(yīng)結(jié)束后只能肉眼判斷結(jié)果。將反 應(yīng)管放置在白色背景（如白紙）前觀察。擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照管內(nèi)反應(yīng)液將呈現(xiàn) 藍(lán)色，無(wú)模板和無(wú)引物的陰性對(duì)照將呈淺藍(lán)色。如果擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照管內(nèi)反 應(yīng)液不呈現(xiàn)藍(lán)色，或無(wú)模板和無(wú)引物的陰性對(duì)照任何一個(gè)呈現(xiàn)藍(lán)色，則說(shuō) 明試劑有問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)無(wú)效。請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。

8. 如果實(shí)驗(yàn)有效，則樣品管的顏色接近擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照管則說(shuō)明有擴(kuò)增，如果 接近無(wú)模板和無(wú)引物的陰性對(duì)照，則說(shuō)明無(wú)擴(kuò)增。反應(yīng)結(jié)果示例如下（9 為陰性，10 為陽(yáng)性）：

9. 反應(yīng)結(jié)束后，如是用熒光 PCR 儀擴(kuò)增，則可分析擴(kuò)增曲線和 Ct。試劑盒 提供的陽(yáng)性對(duì)照的 Ct 將小于 60，如果大于 60，說(shuō)明試劑可能失效，需跟 廠家聯(lián)系。無(wú)模板陰性對(duì)照和無(wú)引物陰性對(duì)照的 Ct 將大于 120。如果任 何小于 60，則說(shuō)明試劑或環(huán)境被污染，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或跟廠家聯(lián)系。如果對(duì) 照結(jié)果正常，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)有效，再分析樣品。樣品的 Ct 在 60 以下的為陽(yáng)性， 90 以上的為陰性，60-90 之間的為疑難樣品，需要重復(fù)一次，如果還在 60-90，需要電泳檢測(cè)。

10. 當(dāng)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)和可視化檢測(cè)同時(shí)使用時(shí)，如果不一致，以實(shí)時(shí)熒光 LAMP 的數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。一般可視化結(jié)果滯后實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)結(jié)果 20-30 分鐘，也就是 說(shuō)，在 qPCR 儀上第 30 分鐘時(shí)呈現(xiàn)陽(yáng)性的樣品，其顏色變化在第 50-60 分鐘時(shí)才能觀察到。