百日咳波氏桿菌PCR試劑盒

Bordetella pertussis

產(chǎn)品及特點(diǎn)

百日咳是一種由百日咳波氏桿菌引起的急性呼吸道傳染病。百日咳波氏桿 菌是革蘭陰性桿菌，可產(chǎn)生一些致病物質(zhì)，包括百日咳毒素、氣管細(xì)胞毒素、 腺苷酸環(huán)化酶毒素、不耐熱毒素以及內(nèi)毒素等。百日咳毒素可使患者淋巴組織 中的淋巴細(xì)胞動(dòng)員到周圍血液及氣管，細(xì)胞毒素可特異性損傷氣管纖毛上皮細(xì) 胞，使之變性、壞死。百日咳的臨床特征為咳嗽逐漸加重，呈典型的陣發(fā)性、 痙攣性咳嗽，咳嗽終末出現(xiàn)深長(zhǎng)的雞啼樣吸氣性吼聲，病程長(zhǎng)達(dá) 2-3 個(gè)月，故 有百日咳之稱。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測(cè)百日咳波氏桿菌的試劑盒，它 具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增百日咳波氏桿菌，與其他病原沒有 交叉反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。 

百日咳波氏桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。