牛冠狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Bovine Coronavirus(BCoV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

牛冠狀病毒（Bovine Coronavirus，BCoV）屬于冠狀病毒科，冠狀病毒屬 2a 亞群，是引起新生犢牛腹瀉、成年牛冬痢和呼吸道感染的重要病原。流行病學(xué) 調(diào)查表明，牛冠狀病毒在牛場(chǎng)中普遍存在，主要通過消化道和呼吸道傳播，感染 的牛長期帶毒并在一定時(shí)期內(nèi)持續(xù)排毒，易造成牛群的大范圍感染。因此，對(duì)帶 毒牛的及時(shí)檢出和牛場(chǎng)環(huán)境監(jiān)測(cè)就顯得尤為重要。本產(chǎn)品就是專門用于牛冠狀病 毒的快速熒光 RT-PCR 檢測(cè)的試劑盒，在毒?；蚺?chǎng)環(huán)境的檢測(cè)領(lǐng)域有廣泛用 途，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 使用 RNase H 已經(jīng)突變的 SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，減少了 RT 過程中 RNA 的降解。

3. 使用熱啟動(dòng)的 Taq DNA 聚合酶，降低了非特異性擴(kuò)增。

4. 熒光定量檢測(cè)，所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結(jié)合，反應(yīng)特異性強(qiáng)。適 用于不需要 ROX 做校正染料的熒光 PCR 儀。

5. 產(chǎn)品的有效線性范圍廣，定量更加準(zhǔn)確。

6. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性高，不會(huì)誤檢牛輪狀病毒（BRV）、牛病毒性腹瀉病毒 （BVDV）和牛流行熱病毒（BEFV）等常見牛類病毒。

7. 引物是根據(jù)保守的 N 基因設(shè)計(jì)，產(chǎn)物長度為 100 bp。 

牛冠狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備 用自選方法純化 BCoV 樣品的 RNA，

二、RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA 按照下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 uL 體系）： 成份 用量 RNA 模板（自備） 由于一般不知病毒RNA濃度,用1-10 uL即可 BCoV 專一性引物二 2 uL RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 70℃保溫 5 min 變性模板后立即冰浴。 RT Buffer(含 dNTP) 5 uL 37℃保溫 5 min。 SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 2 uL 42℃保溫 60 min。此步為 RT 反應(yīng)。 70℃保溫 10 min 以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以 直接作為 PCR 模板使用，不需要純化

三、設(shè)置熒光 PCR 反應(yīng)（50 uL 體系）1. 配制 8-10 個(gè)濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)品：用 DNA 稀釋液將 BCoV 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 8-10 個(gè)濃度，待用。 2. 在 PCR 管中加入下列成分（N 跟據(jù)稀釋度由客戶自己決定）： 

3. 上機(jī)進(jìn)行 PCR。熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)為（以 ABI7500 熒光定量 PCR 儀 為參考）:

4. 根據(jù) 8-10 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的 Ct 值（X 軸）和濃度（X 軸）描出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用待測(cè) 樣品 Ct 值推出其濃度。