當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次犬冠狀病毒RT-PCR試劑盒
供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0171 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
犬冠狀病毒RT-PCR試劑盒
Canine Corona Virus(CCoV)
產品及特點
犬冠狀病毒(Canine coronavirus,CCV )為單鏈 RNA 病毒,有 6~7 種多 肽,其中 4 種是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神經氨酸酶。可使犬發(fā)生程度不同的胃 腸炎癥狀,特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食等癥狀。本病一年四季均可發(fā)生, 以冬季多發(fā),病犬是主要的傳染原,犬可通過呼吸道、消化道、糞便及污染物傳染。 該病一但發(fā)生,同窩犬同室犬很難控制均可造成感染。幼犬死亡率較高,對幼犬的 危害較大。近的研究發(fā)現(xiàn),CCV 感染的宿主范圍有不斷擴大的趨勢,許多野生動物 如虎、獅、大熊貓、小熊貓、水紹也可感染。所以對犬呼吸道病毒的快速準確檢測 與鑒定具有重要的臨床意義。本產品根據(jù) RT-PCR 原理開發(fā),它具有下列特點:
1.一站式,用于不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2.根據(jù)牛病毒性腹瀉病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達到至少1000拷貝/反應。
4.使用一管式qRT-PCR技術,RT和PCR兩步在一個試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
犬冠狀病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 雙酶一管式 RT-PCR Buffer,2× | 750 uL |
試劑二 | MMLV-Taq Mix | 100 uL |
試劑三 | CCV 專一性引物對 | 100 uL |
試劑四 | CCV 陽性對照(10E8 拷貝/uL) | 50 uL |
試劑五 | 超純水 | 1 mL |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份) |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑 一管式病毒 RNAout 或柱式病毒 RNAout
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化可能含 CCV 樣品的 RNA,也可以另購本公司的一管式病毒 RNAout 或柱式病毒 RNAout,上述兩款產品跟本試劑盒兼容。
二、陽性對照
1. 為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對 照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 使用本陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。 在專門的區(qū)域操作。
三、設置 RT-PCR 反應(30 uL 體系)
3. 在 PCR 管中加入下列成分:
成分 | 樣品 | 陽性對照 | 陰性對照 |
雙酶一管式 RT-PCR Buffer,2× | 15 uL | 15 uL | 各15 uL |
CCV 專一性引物對 引物混合物 | 2μL | 2μL | 2μL |
樣品 RNA | 1-5 uL |
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CCV 陽性對照 |
| 2 uL |
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補超純水到 | 28 uL | 28 uL | 28 uL |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
4. 輕柔混勻后上機,按下面參數(shù)進行 RT-PCR。
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉錄 | 60℃ | 30 分鐘 |
預變性 | 94℃ | 2 分鐘 |
PCR 反應 (30 個循環(huán)) | 94℃ | 30 s |
49℃ | 30 s | |
72℃ | 30 s | |
延伸 | 72℃ | 5 分鐘 |
5. 電泳檢測 RT-PCR 產物。預期的 PCR 產物長度為 384bp。
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