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        1. 上海信裕生物科技有限公司
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          犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

          參   考   價: 3990 3790

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時間:2020-07-28 15:14:24瀏覽次數(shù):468次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號 XY-0173 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
          犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒會引起鮑病毒病,危害的主要對象是我國 南方養(yǎng)殖的九孔鮑、雜色鮑,北方地區(qū)養(yǎng)殖的皺紋盤鮑。該病潛伏期短,發(fā)病急,傳染 性強(qiáng),死亡率高,造成鮑種苗及成鮑的大量死亡,4~30d 內(nèi)死亡率高達(dá) 95%以上,溶 藻膠弧菌和副溶血弧菌可能會和病毒共同感染鮑并且是鮑病的共同致病因子。

          犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

          Canine Corona Virus(CCoV)

          產(chǎn)品及特點

          犬冠狀病毒(Canine Corona Virus,CCoV )為單鏈 RNA 病毒,有 6-7 種 多肽,其中 4 種是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神經(jīng)氨酸酶。可使犬發(fā)生程度不同 的胃腸炎癥狀,特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食等癥狀。本病一年四季均可 發(fā)生,以冬季多發(fā),病犬是主要的傳染原,犬可通過呼吸道、消化道、糞便及污 染物傳染。該病一但發(fā)生,同窩犬同室犬很難控制均可造成感染。幼犬死亡率較 高,對幼犬的危害較大。近的研究發(fā)現(xiàn) CCoV 感染的宿主范圍有不斷擴(kuò)大的趨 勢,許多野生動物如虎、獅、大熊貓、小熊貓、水紹也可感染。本產(chǎn)品就是以探針 法熒光定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測犬冠狀病毒的試劑盒,它具有下 列特點:

          1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

          2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

          3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

          4. 特異性高,引物是根據(jù)犬冠狀病毒高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

          5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

          6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

          犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

          編號

          成分

          規(guī)格

          試劑一

          探針法 qRT-PCR 緩沖液

          500μL(藍(lán)蓋) 

          試劑二

          探針法 qRT-PCR 酶混合液

           100μL(紅蓋)

          試劑三

          熒光 PCR 模板稀釋液

          1 mL(亮黃蓋)

          試劑四

          犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 引物 混合液

          100 μL(白蓋)

          試劑五犬冠狀病毒 qRT-PCR 探針 50 μL(棕色管)
          試劑 犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)50 μL(黃蓋) 

          試劑

          使用手冊

          1 份

          運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。 

          自備試劑 樣品 DNA。

          使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

          1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

          2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液,用帶芯槍 頭,下同)。

          3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          二、樣品 RNA 的制備

          7. 如果有 N 個樣品,設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性 對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

          8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。

          三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

          9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用 水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

          10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后后加): 

          成分

          樣品管 N+2 個

          PCR 陰性 對照管

          標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

          探針法 qRT-PCR 緩沖液

          10 μL

          10 μL

          10 μL

          探針法 qRT-PCR 酶混合液

           各 2 μL

           2 μL

           各 2 μL

           犬冠狀病毒 qRT-PCR 探針各 1 μL1 μL 各1 μL

          藍(lán)犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 引物混合液

          各 2 μL

           2 μL

           各 2 μL

          待測樣品 RNA 模板 各 5 μL  
          超純水  5 μL 
           第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 (2-7 號)   各 5 μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

          11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR:

          過程

          溫度

          時間

           逆轉(zhuǎn)錄50℃30 min
           預(yù)變性 94℃ 10 min

           

          qRT-PCR 反應(yīng) (40 個循環(huán))

          94℃

          15sec

          60℃

          1 min(采集 FAM 通道的熒光 信號)

           

          五、數(shù)據(jù)處理

          12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值 為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

          13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。

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