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        1. 上海信裕生物科技有限公司
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          肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒

          參   考   價: 3490 3290

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時間:2020-07-28 17:03:56瀏覽次數(shù):452次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號 XY-0197 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
          肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

          肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒

          Chlamydia pneumoniae

          產(chǎn)品及特點

          衣原體肺炎是由衣原體引起的肺炎,肺炎衣原體肺炎多見于學(xué)齡兒童,大部 分為輕癥,發(fā)病常隱匿。感染率沒有性別差異,四季均可發(fā)生。人類的肺炎衣原 體感染是世界普遍性的。肺炎衣原體傳染途徑是通過呼吸道分泌物的人-人傳播。 因此,在半封閉的環(huán)境如家庭、學(xué)校、以及其他人口集中的工作區(qū)域可存在 小范圍的流行。肺炎衣原體的感染還可能與哮喘、冠心病及動脈粥樣硬化的發(fā)病、 慢性阻塞性肺疾病的急性發(fā)作和惡化有關(guān)。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測肺炎衣原體的試劑盒,它具有下列特點:

          1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

          2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

          3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

          4. 特異性高,引物是根據(jù)肺炎衣原體高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

          5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

          6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

          肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

           

          編號

          成分

          規(guī)格

          試劑一

          2×Probe qPCR MagicMix

          500 μL(本色蓋)

          試劑二

          熒光 PCR 模板稀釋液

          1 mL(黃蓋)

          試劑三

          肺炎衣原體探針法 qPCR 引物混合 液

          100 μL(白蓋)

          試劑四

          肺炎衣原體 qPCR 探針

          50 μL(棕色管)

          試劑五 肺炎衣原體探針法 qPCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) 50 μL(黃蓋)

          試劑六

          使用手冊

          1 份

          運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。

          自備試劑  DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。

          使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

          1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

          2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

          3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

          二、樣品 DNA 的制備

          7. 如果有 N 個樣品,好設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性 對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

          8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。

          三、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

          9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用 水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后后加):

          成分

          樣品管 N+2 個

          PCR 陰性 對照管

          標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

          2×Probe qPCR MagicMix

          10 μL

          10 μL

          各 10 μL

          肺炎衣原體 qPCR 探針

          1 μL

          1 μL

          1 μL

          肺炎衣原體探針法 qPCR 引物混 合液

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          N+2 個待測 DNA 模板 

          7 μL

           

           

           超純水  7 μL 

          第 7 步所得 PCR 超純水陽性對照 稀釋液(2-7 號)

           

           

          7 μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

          11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR:

          過程

          溫度

          時間

          預(yù)變性

          95℃

          3 min

           

          PCR 反應(yīng) (40 個循環(huán))

          95℃

          15sec

          60℃

          1 min(采集 FAM 通道的熒光 信號)

          四、數(shù)據(jù)處理

          12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

          13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值 小于 40,擴增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽性,否則為陰性。

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