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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-07-29 15:13:35瀏覽次數(shù):448次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0211 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
Clostridium sordellii
產(chǎn)品及特點
索氏梭狀芽孢桿菌(Clostridium sordellii)是引起肺炎,關節(jié)炎、腹膜炎 和心內(nèi)膜炎的病原菌,常感染產(chǎn)婦、流產(chǎn)產(chǎn)婦,注射吸毒犯等人員,因此快速檢 測索氏梭狀芽孢桿菌具有重要意義。熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技 術,本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測索氏梭狀芽 孢桿菌的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 特異性高,引物是根據(jù)索氏梭狀芽孢桿菌高度保守區(qū)設計,不會擴增其他微生物。
3. 引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。
4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。
索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL(棕色) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物混 合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL) | 50μL(紅蓋) |
試劑五 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20 次(1mL,綠蓋)) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、制備標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提 供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備 陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果進行定量分析,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做定 性分析,則 6 個標準曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。 以下只介紹定量分析的反應設置。
10. 在標記管中按下表加入各成分:
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | 標準曲線 樣品管(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物 混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個待測樣品 DNA 模板 | 6 μL |
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自備超純水 | 6 μL | ||
第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號) |
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| 各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…) |
11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。
四、熒光定量 PCR 反應參數(shù)
過程 | 溫度 | 時間 |
預熱 | 50℃ | 2 min |
預變性 | 95℃ | 10 min |
PCR 反應 (40 個循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min(采集 SYBR 通道的熒 光信號) |
五、數(shù)據(jù)處理
12. 設定 60℃-96℃范圍的熔解曲線分析,排除假陽性。
13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 32。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 32 則為陰性,如果小 于或等于 30 則為陽性。如果在 30-32 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 32 則為陰性,如果小于 30,則為陽性。
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