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        1. 上海信裕生物科技有限公司
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          當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

          參   考   價: 2490 2290

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價以合同協(xié)議為準

          產(chǎn)品型號50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時間:2020-07-29 15:13:35瀏覽次數(shù):448次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號 XY-0211 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
          索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

          Clostridium sordellii

          產(chǎn)品及特點

          索氏梭狀芽孢桿菌(Clostridium sordellii)是引起肺炎,關節(jié)炎、腹膜炎 和心內(nèi)膜炎的病原菌,常感染產(chǎn)婦、流產(chǎn)產(chǎn)婦,注射吸毒犯等人員,因此快速檢 測索氏梭狀芽孢桿菌具有重要意義。熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技 術,本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測索氏梭狀芽 孢桿菌的試劑盒,它具有下列特點:

          1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。

          2. 特異性高,引物是根據(jù)索氏梭狀芽孢桿菌高度保守區(qū)設計,不會擴增其他微生物。

          3. 引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。

          4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

          5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。

          6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

           

          編號

          成分

          規(guī)格

          試劑一

          2×PCR MagicMix

          500μL(棕色)

          試劑二

          熒光 PCR 模板稀釋液

          1 mL(黃蓋)

          試劑三

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物混 合液

          100 μL(白蓋)

          試劑四

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL)

          50μL(紅蓋)

          試劑五 天凈沙核酸釋放劑試用裝 20 次(1mL,綠蓋))

          試劑六

          使用手冊

          1 份

          運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。

          自備試劑   樣品 DNA。

          使用方法 一、制備標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

          1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

          2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

          3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提 供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

          4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

          5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

          6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

          二、樣品 DNA 的制備

          7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

          8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備 陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

          三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

          9. 如果進行定量分析,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做定 性分析,則 6 個標準曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。 以下只介紹定量分析的反應設置。

          10. 在標記管中按下表加入各成分:

          成分

          樣品管 N+2 個

          PCR 陰性 對照管

          標準曲線 樣品管(2-7 管)

          2×qPCR MagicMix

          10 μL

          10 μL

          各 10 μL

          索氏梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物 混合液

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          自備 10×ROX (見注)

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          N+2 個待測樣品 DNA 模板 

          6 μL

           

           

          自備超純水  6 μL 

          第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號)

           

           

          各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

          11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。

          四、熒光定量 PCR 反應參數(shù)

          過程

          溫度

          時間

           預熱50℃ 2 min

          預變性

          95℃

          10 min

           

          PCR 反應

          (40 個循環(huán)

          95℃

          15 sec

          60℃

          1 min(采集 SYBR 通道的熒 光信號)

          五、數(shù)據(jù)處理

          12. 設定 60℃-96℃范圍的熔解曲線分析,排除假陽性。

          13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

          14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 32。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 32 則為陰性,如果小 于或等于 30 則為陽性。如果在 30-32 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 32 則為陰性,如果小于 30,則為陽性。

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