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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0213	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒

Clostridium spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

梭狀芽孢桿菌（Clostridium spp.）屬于孢子菌，在自然界中是一種非常 *的種類。本菌屬細(xì)菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、人和動(dòng)物腸道以及物中。多為腐物寄生菌，少數(shù)為致病菌，能分泌外毒素和侵襲性酶類，引起人和動(dòng)物患病。因此快速靈敏檢測梭狀芽孢桿菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增梭狀芽苞桿菌 DNA，跟其他微生物無交叉反應(yīng)。能檢測出的梭狀芽苞桿菌包括丁酸梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、新生兒梭菌、生胞梭菌、艱難梭菌、雙酶梭菌、乙二酸梭菌、索氏梭菌等。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	梭狀芽苞桿菌屬通用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	梭狀芽苞桿菌屬通用 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對照管	PCR 陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
梭狀芽苞桿菌屬通用PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
樣品制備陰性對照（超純水）		18 μL
樣品制備陽性對照（梭狀芽苞桿菌屬通用陽性對照的 100 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
	60℃	15 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。