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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次柯薩奇病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-07-29 16:36:19瀏覽次數(shù):394次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0228 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
柯薩奇病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
Coxsakie Virus(CV)
產(chǎn)品及特點
柯薩奇病毒(Coxsakie Virus,CV)是一種RNA病毒,是一類常見的經(jīng)呼吸道和消化道感染人體的病毒,感染后人會出現(xiàn)發(fā)熱、打噴嚏、咳嗽等感冒癥狀。妊娠不同時期柯薩奇病毒隱性感染對胎兒畸形、新生兒心腦疾患、母-嬰垂直傳播及剖宮產(chǎn)率無明顯差異,且有8例轉(zhuǎn)陰,這可能和應用干擾素及抗病藥物有關(guān)。同時也提示孕婦產(chǎn)前定期柯薩奇病毒的篩查,因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點:
1.一站式,用于不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2.根據(jù)柯薩奇病毒的保守基因序列設(shè)計的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達到至少1000拷貝/反應。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
柯薩奇病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×qRT-PCR 緩沖液 | 500 μL(棕色管) |
試劑二 | 10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL(紅蓋) |
試劑三 | ROX染料I | 50 μL(棕色管) |
試劑四 | ROX染料II | 50 μL(棕色管) |
試劑五 | 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL(亮黃蓋) |
試劑六 | 柯薩奇病RT-PCR引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑七 | 柯薩奇病RT-PCR陽性對照 (1×10E8拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑八 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20次(1mL,綠蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 1份 |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DNA段作為陽性對照。
自備試劑 樣品RNA
使用方法 一、稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原。
1.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
2.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
3.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品RNA的制備
5.如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對照。
6.用自選方法純化N+2個樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置RT-PCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)
7.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號陽性對照稀釋液做模板)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把6個標曲反應縮減成1個,其余不變。
8.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加):
成分 | N+2個制備所得樣品 | RT-PCR陰性對照 | RT-PCR陽性 對照(2-7管) |
2×qRT-PCR 緩沖液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
柯薩奇病RT-PCR 引物混合物 | 2μL | 2μL | 各2μL |
50×ROX (見注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
樣品制備所得RNA模板(來于第8步) | 5.6μL | 不加 | 不加 |
稀釋所得6個陽性對照(來于第6步) | 不加 | 不加 | 各5.6μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…) |
10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
9.上機后按下面參數(shù)進行RT-PCR(參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化)。
過程 | 溫度 | 時間 |
RT(逆轉(zhuǎn)錄) | 50℃ | 15-30分鐘 |
預變性 | 94℃ | 2分鐘 |
RT - PCR反應 (30個循環(huán)) | 95℃ | 15 秒 |
60℃ | 15 秒(采集FAM通道的熒光信號) | |
72℃ | 15 秒 | |
按儀器預設(shè)程序進行溶解曲線分析 |
四、數(shù)據(jù)處理
10. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于 或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于 或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等 于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次
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