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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-07-29 17:16:07瀏覽次數(shù):448次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0238 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒
Cyprinid Herpesvirus(CyHV)
產(chǎn)品及特點
鯉皰疹病毒通用(Cyprinid Herpesvirus,CyHV)是引起具有高度傳染性的鯉 魚皰疹的病原體,臨床上很難與口蹄疫、水皰病等疾病區(qū)別。易感鯉魚感染后,病初體 溫上升至 40~42℃,食欲下降,常出現(xiàn)水皰。隨后水皰破裂,遺留糜爛面,通常在 5~ 7 天內(nèi)愈合,同時體溫恢復(fù)正常。鯉魚皰疹的死亡率一般不超過 5%。鯉魚群中大量感 染時,也可經(jīng)直接接觸而擴(kuò)散,但傳播速度并不迅速,仍會對養(yǎng)魚業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p害,因 此快速檢測鯉皰疹病毒通用具有重要意義,為此本公司開發(fā)了簡單快捷的鯉皰疹病毒通 用染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鯉皰疹病毒通用保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL(棕色管) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 鯉皰疹病毒通用PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 鯉皰疹病毒通用PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 50μL(紅蓋) |
試劑五 | DNA 病毒裂解液(試用裝) | 15 次(9 mL) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬 不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對 照
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備
8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照), 一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求 的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品, 則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。
9. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。
10. 如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個 樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復(fù),則 反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | PCR 陽性 對照管(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix (棕色管) | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
鯉皰疹病毒通用 PCR 引物混合液(白蓋) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 待測樣品 cDNA 模板 | 6 μL |
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第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號) |
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| 各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…) |
12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應(yīng) (30 個循環(huán)) | 94℃ | 60 秒 |
50℃ | 60 秒 | |
72℃ | 60 秒 |
13. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時, 大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光 譜在 530 nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。
四、數(shù)據(jù)處理
14. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
15. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性,如果小于 40,則為陽性。
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