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        1. 上海信裕生物科技有限公司
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          鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒

          參   考   價: 2490 2290

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時間:2020-07-29 17:16:07瀏覽次數(shù):448次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號 XY-0238 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
          鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

          鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒

          Cyprinid Herpesvirus(CyHV)

          產(chǎn)品及特點

          鯉皰疹病毒通用(Cyprinid Herpesvirus,CyHV)是引起具有高度傳染性的鯉 魚皰疹的病原體,臨床上很難與口蹄疫、水皰病等疾病區(qū)別。易感鯉魚感染后,病初體 溫上升至 40~42℃,食欲下降,常出現(xiàn)水皰。隨后水皰破裂,遺留糜爛面,通常在 5~ 7 天內(nèi)愈合,同時體溫恢復(fù)正常。鯉魚皰疹的死亡率一般不超過 5%。鯉魚群中大量感 染時,也可經(jīng)直接接觸而擴(kuò)散,但傳播速度并不迅速,仍會對養(yǎng)魚業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p害,因 此快速檢測鯉皰疹病毒通用具有重要意義,為此本公司開發(fā)了簡單快捷的鯉皰疹病毒通 用染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒,它具有下列特點:

          1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

          2. 根據(jù)鯉皰疹病毒通用保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

          3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

          4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。

          5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

          6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

          鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

           

          編號

          成分

          規(guī)格

          試劑一

          2×PCR MagicMix

          500μL(棕色管)

          試劑二

          熒光 PCR 模板稀釋液

          1 mL(黃蓋)

          試劑三

          鯉皰疹病毒通用PCR 引物混合液

          100 μL(白蓋)

          試劑四

          鯉皰疹病毒通用PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL)

          50μL(紅蓋)

          試劑五 DNA 病毒裂解液(試用裝) 15 次(9 mL)

          試劑六

          使用手冊

          1 份

          運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。

          自備試劑  DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。

          使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

          1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬 不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對 照

          2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

          3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

          4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

          5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

          6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

          7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備

          8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照), 一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求 的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品, 則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

          9. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。 

          10. 如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個 樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復(fù),則 反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

          11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):

          成分

          樣品管 N+2 個

          PCR 陰性 對照管

          PCR 陽性 對照管(2-7 管)

          2×qPCR MagicMix (棕色管)

          10 μL

          10 μL

          各 10 μL

          鯉皰疹病毒通用 PCR 引物混合液(白蓋)

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          自備 10×ROX (見注)

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          N+2 待測樣品 cDNA 模板 

          6 μL

           

           

          第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號)

           

           

          各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

          12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。

          過程

          溫度

          時間

          預(yù)變性

          94℃

          5 分鐘

           

          PCR 反應(yīng)

          (30 個循環(huán)

          94℃

          60 秒

          50℃ 60 秒

          72℃

          60 秒

          13. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時, 大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光 譜在 530 nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。

          四、數(shù)據(jù)處理

          14. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

          15. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性,如果小于 40,則為陽性。

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