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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次鴨瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-07-30 15:58:14瀏覽次數(shù):475次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | XY-0254 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
鴨瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
Duck Plague Virus(DPV)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
鴨瘟(Duck plague)又名鴨病毒性腸炎,是鴨、鵝和其他雁形目禽類的一 種急性、熱性、敗血性傳染病。病原為鴨瘟病毒(Duck Plague Virus)屬于皰 疹病毒科皰疹病毒屬中的濾過性的病毒。該病的特征是流行廣泛,傳播迅速,發(fā) 病率和死亡率都高。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門 檢測(cè)鴨瘟病毒的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)鴨瘟病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),,不會(huì)跟其他病毒株 DNA 發(fā)生交叉 反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
鴨瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500 μL(本色蓋) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 鴨瘟病毒探針法 qPCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 鴨瘟病毒 qPCR 探 針 | 50 μL(棕色管) |
試劑五 | 鴨瘟病毒探針法 qPCR 陽性對(duì)照 (1×10E8 拷 貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品,好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性 對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用 水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加):
成分 | 樣品管 N+2個(gè) | PCR陰性對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7管) |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
鴨瘟病毒qPCR探針 | 1 μL | 1 μL | 各1 μL |
鴨瘟病毒探針法qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
N+2個(gè)待測(cè)DNA模板 | 7 μL | 不加 | 不加 |
超純水 | 不加 | 7 μL | 不加 |
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7號(hào)) | 不加 | 不加 | 各7 μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管…) |
11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
PCR反應(yīng) (40個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15sec |
60℃ | 1 min(采集 FAM 通道的熒 光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值 為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 40,擴(kuò)增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽性,否則為陰性。
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