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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0315	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

貓杯狀病毒前病毒PCR試劑盒

Feline Calicivirus(FCV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

貓杯狀病毒（Feline calicivirus, FCV）是一種無(wú)衣殼的 RNA 病毒，主要在淋巴結(jié)內(nèi)繁殖復(fù)制。主要通過(guò)飛沫傳播，所謂的飛沫傳播指得就是打噴嚏，噴口水的傳播方式。貓杯狀病毒感染是貓病毒性呼吸道傳染病，主要表現(xiàn)為上呼吸道癥狀，即精神沉郁、漿液性和粘液性鼻漏、結(jié)膜炎、口腔炎、氣管炎、支氣管炎，伴有雙相熱。貓杯狀病毒感染是貓的多發(fā)病，發(fā)病率高，死亡率低。因此檢測(cè)貓杯狀病毒具有重要意義。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供 FCV 的 cDNA 模板（需要提前做逆轉(zhuǎn)錄）或含有 FCV 前病毒 DNA 的樣品。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增貓杯狀病毒前病毒，與其他病毒沒(méi) 有交叉反應(yīng)

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

貓杯狀病毒前病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黃蓋）
試劑二	超純水	1 mL（藍(lán)色））
試劑三	貓杯狀病毒前病毒 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	貓杯狀病毒前病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑	20 次（1 mL，綠蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果是提取的 FCV 的 RNA，則先逆轉(zhuǎn)錄得到 cDNA。本試劑盒不提供相關(guān)試劑。

2. 如果是要提取前病毒 DNA，則用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。

3. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在 200μL 水中加 10μL 貓杯狀病毒前病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì) 照是直接用 200μL 水。提取結(jié)束后后得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則 PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

4. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個(gè) 樣品管	PCR陰性對(duì)照	PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
貓杯狀病毒前病毒PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（水）		18 μL	-
PCR 陽(yáng)性對(duì)照（貓杯狀病毒前病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液）	-		18 μL

5. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （30 個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測(cè)

6. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。