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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0331	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

副豬嗜血桿菌PCR試劑盒

Group B Streptococcus spp.(GBS)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, HPS)屬巴斯德氏菌科嗜血桿菌屬，是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)且沒有運(yùn)動性的小型、多形性、革蘭氏陰性桿菌。HPS 可引起豬多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重時導(dǎo)致體溫升高、呼吸困難甚至死亡,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對 HPS 的診斷主要是細(xì)菌分離培養(yǎng)和 PCR。HPS 培養(yǎng)需要 NAD、馬血清和 5%CO2 環(huán)境，需 24-36 小時，還容易出現(xiàn)雜菌污染，因此 PCR 是目前診斷 HPS 常用的方法。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的副豬嗜血桿菌檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)副豬嗜血桿菌，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

副豬嗜血桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃v）
試劑三	副豬嗜血桿菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	副豬嗜血桿菌 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
副豬嗜血桿菌 PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2個樣品DNA模板	各18 μL	-	-
PCR 陰性對照（水）	-	18 μL	-
PCR 陽性對照（副豬嗜血桿菌 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液）	-	-	18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。