傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒

Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus， ISKNV）會(huì)引起傳染性脾腎壞死病，是以脾、腎壞死為主要病理特征的一種病毒 性疾病。病魚(yú)嘴張大，呼吸加快，食欲下降，魚(yú)體變黑，有時(shí)有抽筋樣顫動(dòng)；頭 部充血，口四周和眼出血；脾臟腫大、糜爛和充血，呈紫黑色；腎臟腫大、充血 和潰爛；肝臟腫大，有缺血狀、土黃色或有淤血點(diǎn)等癥狀；常見(jiàn)有腹水，腸內(nèi)有 時(shí)充滿黃色粘稠物，膽囊腫大；鰓貧血，發(fā)白，伴有寄生蟲(chóng)或細(xì)菌感染出現(xiàn)出血、 腐爛等現(xiàn)象。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國(guó)南方淡水養(yǎng)殖的鱖中，具有很高 的死亡率，對(duì)鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅，嚴(yán)重危害我國(guó)鱖養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，因此傳染 性脾腎壞死病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公 司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的傳染性脾腎壞死病病毒染料法熒光定量 PCR 檢測(cè)試劑盒， 它具有下列特點(diǎn)： 

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2. 根據(jù)傳染性脾腎壞死病病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分 分開(kāi)放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假?yáng)性。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性 對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋作為制備的陽(yáng)性對(duì)照；用水作為制備的陰性對(duì)照。 制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物， 則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物、 陽(yáng)性對(duì)照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性，如果無(wú)則為陰性。