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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0424	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

傳染性脾腎壞死病病毒PCR試劑盒

Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus(ISKNV ）

產(chǎn)品及特點(diǎn)

傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus， ISKNV)引起傳染性脾腎壞死病，又叫鱖暴發(fā)性出血病，它是一種嚴(yán)重危害淡水養(yǎng)殖鱖的傳染性、病毒性疾病，可引起暴發(fā)性死亡，我國(guó)將其列為二類疫病。傳染性脾腎壞死病毒屬虹彩病毒科，病毒有囊膜，二十面體，直徑 125～ 145nm，病毒基因組為雙鏈 DNA。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國(guó)南方淡水養(yǎng)殖的鱖中，具有很高的死亡率，對(duì)鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅。鱖是 ISKNV 的自然宿主和敏感宿主，但該病毒還可以感染 50 多種海、淡水養(yǎng)殖魚類，因此傳染性脾腎壞死病病毒的快速診斷具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增傳染性脾腎壞死病病毒

3. ，與其他病毒沒有交叉反應(yīng)。

4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

6. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

傳染性脾腎壞死病病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黃蓋）
試劑二	超純水	1 mL（藍(lán)色）
試劑三	傳染性脾腎壞死病病毒PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	傳染性脾腎壞死病病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個(gè) 樣品管	PCR陰性對(duì)照	PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
傳染性脾腎壞死病病毒 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（水）		18 μL	-
PCR 陽(yáng)性對(duì)照（傳染性脾腎壞死病病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液）	-		18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	60 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。