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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次鉤端螺旋體通用染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠(chǎng)商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-08-07 09:43:47瀏覽次數(shù):412次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | XY-0453 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
鉤端螺旋體通用染料法熒光定量PCR試劑盒
Leptospira spp.
產(chǎn)品及特點(diǎn)
鉤端螺旋體(Leptospira)簡(jiǎn)稱(chēng)鉤體,種類(lèi)很多,可分為致病性鉤體及非致病性鉤體 兩大類(lèi)。致病性鉤體能引起人及動(dòng)物的鉤端螺旋體病,簡(jiǎn)稱(chēng)鉤體病,是在世界各地都 廣泛流行的一種人畜共患者,中國(guó)絕大多數(shù)地區(qū)都有不同程度的流行,尤以南方各省為嚴(yán)重,對(duì)人民健康危害很大,是中國(guó)重點(diǎn)防治的傳染病之一。本公司開(kāi)發(fā)鉤端螺 旋體通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。
2. 引物根據(jù)鉤端螺旋體專(zhuān)一區(qū)設(shè)計(jì),特異性高。
3. 熒光定量 PCR 檢測(cè),比常規(guī) PCR 更加靈敏。
4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
鉤端螺旋體通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL(棕色) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 鉤端螺旋體通用染料法 qPCR 引物混 合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 鉤端螺旋體通用染料法 qPCR 陽(yáng)性對(duì) 照(1×10E8 拷貝/μL) | 50μL(紅蓋) |
試劑五 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于陽(yáng)性對(duì)照濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千 萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病 原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng) 性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
8. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照), 一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋 的(稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬(wàn)拷貝,可以將 10μL 原 液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此 稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 10000 倍稀釋液)再加 上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取 決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 DNA。
9. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上 步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性 分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用 第 4 號(hào)陽(yáng)性對(duì)照稀釋液,濃度為 14810 拷貝/μL)。下面只描述定量分析的步驟, 定性分析只是把 6 個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成 1 個(gè),其余不變。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加):
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 樣品管(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
鉤端螺旋體通用染料法 qPCR 引物 混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見(jiàn)注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個(gè)待測(cè)樣品 DNA 模板 | 6 μL |
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自備超純水 | |||
第 7 步所得 PCR 陽(yáng)性對(duì)照 稀釋液(2-7 號(hào)) |
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| 各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) |
12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min(采集 SYBR 通道的熒 光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理
13. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品 cDNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
14. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等 于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線(xiàn),Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 40,擴(kuò)增曲線(xiàn)有 明顯起峰,該樣本判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。
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