供貨周期 |
一周 |
規(guī)格 |
50T |
貨號(hào) |
XY-0456 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 |
熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
伊氏李斯特菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
伊氏李斯特菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
Listeria ivanovii
產(chǎn)品及特點(diǎn)
伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)是引起人獸共患伊氏李斯特菌病的病原菌,該菌感染宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)是導(dǎo)致高死亡率的主要原因,較容易感染的動(dòng)物是綿羊,所以該菌又被稱為綿羊伊氏李斯特菌,感染該病菌會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失,因此伊氏李斯特菌的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。熒光定量PCR是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門檢測(cè)伊氏李斯特菌的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)人伊氏李斯特菌高度保守的VP1區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
伊氏李斯特菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×Probe qRT-PCR MagicMix | 500 μL(本色蓋) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 伊氏李斯特菌PCR引物 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 伊氏李斯特菌qPCR探針 | 50 μL(棕色管) |
試劑五 | 伊氏李斯特菌陽(yáng)性對(duì)照2.0 (1×10E8拷貝/μL) | 50 μL (紅蓋) |
試劑六 | 天凈沙核酸釋釋劑(試用裝) | 50次(試用裝) |
試劑七 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液,用帶芯槍 頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品,設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性 對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用 水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加):
成分 | 樣品管 N+2個(gè) | PCR陰性對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7管) |
2×Probe qPCR MagicMix(本色蓋) | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
伊氏李斯特菌 qPCR探針(綠蓋) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
伊氏李斯特菌 PCR引物混合液(白蓋) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
待測(cè)樣品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7號(hào)) | 不加 | 不加 | 各6μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管…) |
11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min |
PCR反應(yīng) (40個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 0.5 min |
50℃ | 0.5 min(采集FAM通道的熒光信號(hào)) |
72℃ | 0.5 min |
后延伸 | 72℃ | |
五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
六、電泳檢測(cè)
13.如果有必要電泳確認(rèn),可取10-20μL PCR產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn)物的大小為400 bp。但電泳非常容易污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境,建議不輕易采納。