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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0457	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

單核細(xì)胞增生李斯特菌PCR試劑盒

Listeria monocytogenes

產(chǎn)品及特點(diǎn)

單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)屬乳酸桿菌科，為革蘭氏陽(yáng)性小桿菌，可以污染食品，導(dǎo)致李斯特病的發(fā)病率日趨上升，臨床表現(xiàn)主要有腦膜炎、敗血性肉芽腫、淋巴結(jié)腫大等。本病遍及世界各地，是人畜共患的傳染病。人類感染有增多趨勢(shì)，特別是新生兒、老年人、孕婦及免疫功能低下者易感性更高。對(duì)食品中的單增利斯特菌做出快速的檢測(cè)和鑒定，是預(yù)防利斯特病的有效方法，因此單核細(xì)胞增生李斯特菌的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供細(xì)菌DNA模板。
2.引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增單核細(xì)胞增生李斯特菌。
3.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。

單核細(xì)胞增生李斯特菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黃蓋）
試劑二	超純水	1 mL（藍(lán)色）
試劑三	單核細(xì)胞增生李斯特菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	單核細(xì)胞增生李斯特菌PCR陽(yáng)性對(duì)照	100 μL（黃蓋）
試劑五	天凈沙DNA釋放劑試用裝	50次（試用裝）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲(chóng) DNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個(gè) 樣品管	PCR陰性對(duì)照	PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
單核細(xì)胞增生李斯特菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18 μL	-	-
樣品制備陰性對(duì)照	-	18 μL	-
樣品制備陽(yáng)性對(duì)照	-	-	18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	94℃	20 sec
	50℃	20 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。