李斯特菌通用PCR試劑盒

Listeria spp.

產(chǎn)品及特點

李斯特菌(Listeria spp.)是一種兼性厭氧細菌，為李斯特菌癥的病原體。李斯特菌是革蘭氏陽性菌，屬厚壁菌門，取名自約瑟夫·李斯特。它主要以食物為傳染媒介，是致命的食源性病原體之一，感染后健康成人可出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，易感者突然發(fā)熱，劇烈頭痛、惡心、嘔吐、腹瀉、敗血癥、腦膜炎、孕婦出現(xiàn)流產(chǎn)，給人體健康帶來較大的損害，因此李斯特菌的快速準確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā)，它具有下列特點：

1.即開即用，用戶只需要提供細菌DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增李斯特菌通用。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。

李斯特菌通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。