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        1. 上海信裕生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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          當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

          腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

          參   考   價(jià): 2990 2790

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號(hào)50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時(shí)間:2020-08-07 11:54:42瀏覽次數(shù):499次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號(hào) XY-0495 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
          腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

          腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

          Mumps Virus(MV)

          產(chǎn)品及特點(diǎn)

          腮腺炎病毒(Mumps Virus,MV)是一種RNA病毒,人是腮腺炎病毒惟一宿主,病毒經(jīng)飛沫傳播易感者為學(xué)齡期兒童,好發(fā)于冬春季節(jié)。本病潛伏期約2~3周,病毒侵入呼吸道上皮細(xì)胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖后,進(jìn)入血流,然后流侵入腮腺及其它腺體器官如睪丸、卵巢、胰腺、腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。臨床表現(xiàn)主要為一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大,伴發(fā)熱、乏力、肌肉疼痛等,并發(fā)睪丸炎者可導(dǎo)致男性不育癥腮腺炎也是導(dǎo)致兒童期獲得性耳聾的常見原因,因此腮腺炎病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點(diǎn):

          1.一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
          2.根據(jù)腮腺炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
          3.基于染料法qRT-PCR檢測(cè),靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
          4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
          5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。

          腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

          編號(hào)

          成  份

          規(guī)格

          試劑一

          2×qRT-PCR 緩沖液

          500 μL(棕色管)

          試劑二

          10×qRT-PCR酶混合液

          100 μL(紅蓋)

          試劑三

           ROX染料I

          50 μL(棕色管)

          試劑四

          ROX染料II

          50 μL(棕色管)

          試劑五

          熒光PCR模板稀釋液

          1mL(亮黃蓋)

          試劑六

          腮腺炎病毒RT-PCR引物混合液

          100 μL(白蓋)

          試劑七

          腮腺炎病毒RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照

          (1×10E8拷貝/μL

          50 μL(黃蓋)

          試劑八

          天凈沙核酸釋放劑試用裝

          20次(1mL,綠蓋)

          試劑九

          使用手冊(cè)

          1份

          運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。陽(yáng)性對(duì)照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供RNA段作為陽(yáng)性對(duì)照。

          自備試劑  樣品RNA

          使用方法 一、稀釋陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原。
          1.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
          2.在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(本試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
          3.換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
          4.換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
          二、樣品RNA的制備
          5.如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋液中的第4號(hào)(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。
          6.用自選方法純化N+2個(gè)樣品的RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
          三、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
          7.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照(用第4號(hào)陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把6個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個(gè),其余不變。
          8.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加):

          成分

          N+2個(gè)制備所得樣品

          RT-PCR陰性對(duì)照

          RT-PCR陽(yáng)性

          對(duì)照(2-7管)

          2×qRT-PCR 緩沖液

          10μL

          10μL

          各10μL

          腮腺炎病毒RT-PCR

          引物混合物

          2μL

          2μL

          2μL

          50×ROX (見注)

          0.4μL

          0.4μL

          各0.4μL

           樣品制備所得RNA模板(來(lái)于8

          5.6μL

          不加

          不加

          稀釋所得6個(gè)陽(yáng)性對(duì)照(來(lái)于第6步)

          不加

          不加

          5.6μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管

          10×qRT-PCR

          酶混合液

          2μL

          2μL

          2μL

          9.上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR(參數(shù)可能會(huì)因儀器不同而需優(yōu)化)。

          過(guò)程

          溫度

          時(shí)間

          RT逆轉(zhuǎn)錄

          50℃

          15-30分鐘

          預(yù)變性

          94℃

          2分鐘

          RT - PCR反應(yīng)

          30個(gè)循環(huán))

          95℃

          15 秒

          60

          15 秒(采集FAM通道的熒光信號(hào)

          72

          15 秒

          儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析

          四、數(shù)據(jù)處理
          10.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
          11.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽(yáng)性。

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