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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-08-07 11:54:42瀏覽次數(shù):499次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | XY-0495 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
Mumps Virus(MV)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
腮腺炎病毒(Mumps Virus,MV)是一種RNA病毒,人是腮腺炎病毒惟一宿主,病毒經(jīng)飛沫傳播,易感者為學(xué)齡期兒童,好發(fā)于冬春季節(jié)。本病潛伏期約2~3周,病毒侵入呼吸道上皮細(xì)胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖后,進(jìn)入血流,然后血流侵入腮腺及其它腺體器官如睪丸、卵巢、胰腺、腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。臨床表現(xiàn)主要為一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大,伴發(fā)熱、乏力、肌肉疼痛等,并發(fā)睪丸炎者可導(dǎo)致男性不育癥,腮腺炎也是導(dǎo)致兒童期獲得性耳聾的常見原因,因此腮腺炎病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點(diǎn):
1.一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
2.根據(jù)腮腺炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測(cè),靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
腮腺炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×qRT-PCR 緩沖液 | 500 μL(棕色管) |
試劑二 | 10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL(紅蓋) |
試劑三 | ROX染料I | 50 μL(棕色管) |
試劑四 | ROX染料II | 50 μL(棕色管) |
試劑五 | 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL(亮黃蓋) |
試劑六 | 腮腺炎病毒RT-PCR引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑七 | 腮腺炎病毒RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照 (1×10E8拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑八 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20次(1mL,綠蓋) |
試劑九 | 使用手冊(cè) | 1份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。陽(yáng)性對(duì)照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供RNA段作為陽(yáng)性對(duì)照。
自備試劑 樣品RNA
使用方法 一、稀釋陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
2.在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(本試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
3.換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
4.換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品RNA的制備
5.如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋液中的第4號(hào)(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。
6.用自選方法純化N+2個(gè)樣品的RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
7.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照(用第4號(hào)陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把6個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個(gè),其余不變。
8.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加):
成分 | N+2個(gè)制備所得樣品 | RT-PCR陰性對(duì)照 | RT-PCR陽(yáng)性 對(duì)照(2-7管) |
2×qRT-PCR 緩沖液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
腮腺炎病毒RT-PCR 引物混合物 | 2μL | 2μL | 各2μL |
50×ROX (見注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
樣品制備所得RNA模板(來(lái)于第8步) | 5.6μL | 不加 | 不加 |
稀釋所得6個(gè)陽(yáng)性對(duì)照(來(lái)于第6步) | 不加 | 不加 | 各5.6μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管…) |
10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
9.上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR(參數(shù)可能會(huì)因儀器不同而需優(yōu)化)。
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
RT(逆轉(zhuǎn)錄) | 50℃ | 15-30分鐘 |
預(yù)變性 | 94℃ | 2分鐘 |
RT - PCR反應(yīng) (30個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 秒 |
60℃ | 15 秒(采集FAM通道的熒光信號(hào)) | |
72℃ | 15 秒 | |
按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析 |
四、數(shù)據(jù)處理
10.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
11.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽(yáng)性。
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