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羅氏熒光定量PCR儀LightCycler480詳細(xì)介紹

一、適用范圍：臨床/科研中利用熒光定量PCR方法檢測(cè)目標(biāo)基因，對(duì)其進(jìn)行定量或者定性分析或進(jìn)行基因分型或檢測(cè)突變，為臨床治療進(jìn)行指導(dǎo)。
二、熒光定量PCR儀LightCycler 480 II性能總結(jié)
作為熒光定量技術(shù)的持有者，羅氏公司一直致力于為客戶提供性能優(yōu)秀的定量產(chǎn)品，羅氏LightCycler^® 480（以下簡(jiǎn)稱LC-480）于2005年底面世，2006年開始在中國(guó)推廣，截至目前，已經(jīng)在中國(guó)各研究及機(jī)構(gòu)銷售達(dá)1000多臺(tái)，市場(chǎng)反應(yīng)熱烈！
    LC-480是在總結(jié)了目前市場(chǎng)上現(xiàn)有熒光定量的特點(diǎn)后，結(jié)合Roche自身的技術(shù)優(yōu)勢(shì)研發(fā)出來(lái)，在以下幾個(gè)方面體現(xiàn)了的技術(shù)特色：
1．反應(yīng)容器及檢測(cè)通量： 
    96孔，可選配升級(jí)為384孔反應(yīng)模塊。用戶可自行更換，無(wú)需工程師到場(chǎng)。
 5色激發(fā)通道：290－800nm， 440，465，498，533，618nm； 6色熒光檢測(cè)通道： 488，510，588，610，640，660nm，適用多種熒光染料，開放性試劑，客戶可根據(jù)實(shí)際情況選擇ROCHE或其他廠家提供的試劑。
2．反應(yīng)體積： 
96孔板： 10-100μl， 384孔板： 3-20μl，可節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
3．溫控系統(tǒng)（標(biāo)準(zhǔn)模式 ）：     
樣本升溫：4.8℃/秒，連續(xù)可調(diào)
均一性： +/-0.1℃（是板式定量PCR中溫度均一性好的產(chǎn)品）
準(zhǔn)確性： +/-0.1℃
反應(yīng)時(shí)間：不借助快速試劑，96孔＜60min，384孔＜­­40min
4．光學(xué)系統(tǒng)： 
4/1）采用白色固態(tài)光源，光強(qiáng)相對(duì)于氙燈更強(qiáng)，波長(zhǎng)范圍為全波長(zhǎng)，適用多種熒光染料，開放性試劑，客戶可跟據(jù)實(shí)際情況選擇ROCHE或其他廠家提供的試劑。
4/2）激發(fā)光經(jīng)五角反射鏡減少光程差，消除光學(xué)邊緣效應(yīng)。
4/3）熱蓋的設(shè)計(jì)減少孔間光學(xué)信號(hào)交叉，鄰近孔之間大交叉干擾<0.02%。顏色補(bǔ)償軟件及濾光片減少同一孔內(nèi)的多種熒光染料的信號(hào)干擾，實(shí)現(xiàn)多重PCR方式。
5．線性范圍及檢測(cè)靈敏度：
定量動(dòng)態(tài)范圍可達(dá)10⁰－10¹⁰，樣品無(wú)需稀釋，達(dá)到單拷貝基因的水平。
6．精確性及重復(fù)性：
孔間檢測(cè)的重復(fù)性為CV≤0.15%?？梢詤^(qū)分1000與2000拷貝的差異，而且此項(xiàng)會(huì)作為裝機(jī)指標(biāo)！
7．檢測(cè)模式:
熒光染料（SYBR Green等）、Taqman 探針、分子信標(biāo)、 Scorpion，雜交探針、單探針等
8．軟件系統(tǒng)革新：
8/1）*的大二階導(dǎo)數(shù)法取Ct值。
8/2）考慮PCR實(shí)際擴(kuò)增效率，而非武斷設(shè)定為2
8/3）含效率校正的相對(duì)定量軟件
8/4）高分辨率熔解曲線分析進(jìn)行基因掃描等

 羅氏熒光定量PCR儀LightCycler480詳細(xì)介紹 特色功能：

1.HRM分析功能：
高分辨率熔解曲線 （High Resolution Melting, HRM）可以從更細(xì)致的程度研究雙鏈DNA的熱變性過程，從而獲取更多的信息量。HRM做為一種創(chuàng)新、均一、PCR擴(kuò)增反應(yīng)后進(jìn)行的分析方法，可應(yīng)用于對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中SNP，基因突變和甲基化等基因變異檢測(cè)等廣泛的研究分析領(lǐng)域,如對(duì)食品中病源微生物的快速篩查與檢測(cè)等。
  憑借LightCycler® 480II系統(tǒng)*的基因掃描軟件和配套提供的高分辨率熔解曲線PCR反應(yīng)即用型體系HRM PCR Master，羅氏診斷應(yīng)用科學(xué)部*提供了基于模塊式定量PCR儀上的整合式基因掃描方案。
2. Universal Probe Library通用探針庫(kù)（＞5000000轉(zhuǎn)錄組）
只需要165個(gè)預(yù)制探針就完成上百萬(wàn)種實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)，對(duì)整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行高效研究。整套探針易于冰箱存儲(chǔ)，讓您的實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)可靈活自在地進(jìn)行。
UPL的165個(gè)探針選自轉(zhuǎn)錄組中高頻率出現(xiàn)的8-和9-堿基序列，確?？梢愿采w任意的一個(gè)轉(zhuǎn)錄組的全部轉(zhuǎn)錄子。
UPL探針僅8到9個(gè)核苷酸長(zhǎng)，且含有Locked Nucleic Acids(LNA)。LNA是一類核糖2、4位羥基縮合形成氧橋的核酸類似物，這一特殊構(gòu)像的核糖能夠促進(jìn)堿基堆積及核糖預(yù)組織效應(yīng)從而提高其熱穩(wěn)定性，使僅不到10個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的探針Tm值有顯著的提高，方便進(jìn)行水解探針法的定量檢測(cè)。并且，含有LNA的UPL探針能夠辨別其他核酸探針無(wú)法區(qū)分的單堿基錯(cuò)配，從而輕松保證您基因表達(dá)檢測(cè)的專一性要求。
3. RealTime ready 預(yù)制檢測(cè)板
這一系列的預(yù)制探針組合是用于多種qPCR檢測(cè)的即用預(yù)制微孔板，可直接用于檢測(cè)大量特定信號(hào)通路、代謝途徑或特定功能相關(guān)的基因表達(dá)情況。為方便使用，已預(yù)裝于LightCycler® 96-/384-孔板中，每一平板都含有目標(biāo)特異的引物以及Universal Probe Library探針。您所需添加的只有預(yù)混酶液、水以及樣本cDNA，就可以獲得類似于微流體芯片的分析功能，整個(gè)過程更加直觀、簡(jiǎn)便。如果您有已知需要檢測(cè)的基因，羅氏還支持為您在線定制專屬的預(yù)制檢測(cè)板，大化地節(jié)省您寶貴的時(shí)間。
除了信號(hào)通路、代謝途徑或特定功能相關(guān)的目標(biāo)基因，每一預(yù)制平板上也包含了逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物特異的對(duì)照以及內(nèi)參基因用于簡(jiǎn)化分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。