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          費氏弧菌發(fā)光桿菌沙土保藏法操作步驟

          閱讀:1113      發(fā)布時間:2017-6-22
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          費氏弧菌發(fā)光桿菌沙土保藏法操作步驟:

          (1)取河沙加入10%稀鹽酸,加熱煮沸30分鐘,以去除其中的有機(jī)質(zhì)。

          (2)倒去酸水,用自來水沖洗至中性。

          (3)烘干,用40目篩子過篩,以去掉粗顆粒,備用。

          (4)另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土,加自來水浸泡洗滌數(shù)次,直至中性。

          (5)烘干,碾碎,通過100目篩子過篩,以去除粗顆粒。

          (6)按一份黃土、三份沙的比例(或根據(jù)需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)摻合均勻,裝入10×100mm的小試管或安瓿管中,每管裝1g左右,塞上棉塞,進(jìn)行滅菌,烘干。

          (7)抽樣進(jìn)行無菌檢查,每10支沙土管抽一支,將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)48小時,若仍有雜菌,則需全部重新滅菌,再作無菌試驗,直至證明無菌,方可備用。

          (8)選擇培養(yǎng)成熟的(一般指孢子層生長豐滿的,營養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好)優(yōu)良費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種,以無菌水洗下,制成孢子懸液。

          (9)于每支沙土管中加入約0.5ml(一般以剛剛使沙土潤濕為宜)孢子懸液,以接種針拌勻。

          (10)放入真空干燥器內(nèi),用真空泵抽干水分,抽干時間越短越好,務(wù)使在12小時內(nèi)抽干。

          (11)每10支抽取一支,用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒,接種于斜面培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng),觀察生長情況和有無雜菌生長,如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長,則說明制作的沙土管有問題,尚須進(jìn)一步抽樣檢查。

          (12)若經(jīng)檢查沒有問題,用火焰熔封管口,放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

          (13)需要使用費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種,復(fù)活培養(yǎng)時,取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi),置溫箱中培養(yǎng)。

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